Samenvatting
Samenvatting Verslag enzymologie_labportfolio 4
- Vak
- Chemie
- Instelling
- 2nd Degree
Eindverslag enzymologie Berekenen van vmax, Km, Ki, extinctiecoëfficiënten 15 paginas
[Meer zien]Voorbeeld 3 van de 17 pagina's
Voorbeeld 3 van de 17 pagina's
In winkelwagenVerkoper
Volgen
Voorbeeld van de inhoud
Verslaggevers: Lector:Groep:
Labportfolio semester 4: Enzymologie
Verslag enzymologie
1 Doel
Het bepalen van de Michaelis-Menten parameters K m en Vmax door middel van twee enzymatische
reacties en inhibitie. Voor deze bepaling moeten eerst de molaire extinctiecoëfficiënten van de
absorberende stoffen p-NA en p-NF bepaald worden.
2 Principe
2.1 Reacties
Continu verloop:
Benzoyl-arginine-p-nitroanilide (BAPNA) benzoyl-argenine p-nitroanilide
Figuur 1 Reactie continu methode: BAPNA met trypsine. De reactie verloopt bij T = 21°C en pH = 8,0.
Hydrolyse reactie met:
Substraat = BAPNA
Enzym : trypsine
Eindproduct: p-NA
Discontinu verloop:
p-nitrofenylfosfaat (kleurloos) p-nitrofenol (kleurloos) p-nitrofenol (geel)
figuur 2 Reactie discontinu methode: p-NPP met zure fosfatase. De reactie verloopt bij T = 21°C en pH = 5,6
Hydrolyse reactie met:
Substraat = p-NPP
Enzym : zure fosfatase
Eindproduct: p-NF
1
,2.2 Formules
Wet van Lambert-Beer
Voor de bepaling van de reactiesnelheden van bovenstaande reacties moeten de molaire
extinctiecoëfficiënten van p-NF en p-NA gekend zijn. Deze worden berekend via de wet van
Labmbert-Beer.
Wet van Lambert-Beer:
E=ɛ.l.c
Met: E: extinctie
ɛ: molaire extinctie in (M.cm)-1
l: weglengte cuvet = 1 cm
c: concentratie in mol.L-1
De gemeten extincties worden uitgezet in een extinctiecurve (E i.f.v. concentratie). De
richtingscoëfficiënt van deze ijklijn is gelijk aan de molaire extinctiecoëfficiënt.
VC-regel
V1 . C1 = V 2 . Co
V 1C1
→ Co =
V2
Met: V1: gekend beginvolume
C1: gekende beginconcentratie
V2: gekend eindvolume
Co: onbekende concentratie na verdunning
Bepalen van de molaire extinctiecoëfficiënten ɛ
ɛ = rico extinctiecurve = b (lijnschatting)
Bepalen van de reactiesnelheid v en v’: continu, discontinu met en zonder inhibitor
∆E b
v= =
min . ε .l ε .l
v
v’ = (enkel bij i.f.v. [S])
[E ]
[S ]
Opstellen Hanes-grafiek: [S] i.f.v.
v'
Legende:
v: reactiesnelheid in M.min-1
v’: reactiesnelheid afhankelijk van enzymconcentratie in mol.(U.min) -1
∆E/min = b: richtingscoëfficiënt van de rechte die verkregen wordt als de extinctie i.f.v. de tijd wordt
uitgezet in min-1
ɛ: molaire extinctiecoëfficiënt van p-NA of p-NF in (M.cm) -1
l: weglengte cuvet = 1 cm
[E]: enzymconcentratie in U.L-1
[S]: substraatconcentratie in M
2
, Bepalen van vmax en Km via de Hanes-transformatie: discontinu methode
1
vmax =
b
a
Km =
b
Legende:
vmax: maximale reactiesnelheid die bereikt kan worden in M.min -1
Km: Michaelis-Menten constante in M
b: rico van de rechte uit de Hanes grafiek
a: y-intercept van de rechte uit de Hanes grafiek
Bepalen van Ki
[I ]
K i = bi
b−1
Legende:
Ki: inhibitorconstante in M
[I]: inhibitorconcentratie in M
bi: rico van de geïnhibeerde reactie uit de Hanes grafiek
b: rico van de niet-geïnhibeerde reactie uit de Hanes grafiek
Statistische verwerking
ei = y i – ÿi
outlier als |ei|> 2*SE
Legende:
ei = residu
yi = voorspelde y-waarde
ÿi = gemeten y-waarde
SE = standaardfout op gevonden rechte
95% betrouwbaarheidsinterval (95% b.i.):
Voor b: [b+t 0,05 R
;8
. SE ( b ) ; b−t 0,05 R
;8
. SE ( b ) ]
2 2
Tabel lijnschatting van een rechte uit een grafiek:
Tabel 1 Legende tabel lijnschatting
b a
SE(b) SE(a)
R2 SE
F df
SSreg Ssres
3 Legende
Tabel 2 Legendetabel
Afkorting Betekenis
p-NF paranitrofenol
p-NA paranitroaniline
BAPNA Benzoyl-arginine-p-nitroanilide
p-NPP paranitrofenylfosfaat
3
Dit zijn jouw voordelen als je samenvattingen koopt bij Stuvia:
Bewezen kwaliteit door reviews
Studenten hebben al meer dan 850.000 samenvattingen beoordeeld. Zo weet jij zeker dat je de beste keuze maakt!
In een paar klikken geregeld
Geen gedoe — betaal gewoon eenmalig met iDeal, Bancontact of creditcard en je bent klaar. Geen abonnement nodig.
Focus op de essentie
Studenten maken samenvattingen voor studenten. Dat betekent: actuele inhoud waar jij écht wat aan hebt. Geen overbodige details!
Veelgestelde vragen
Wat krijg ik als ik dit document koop?
Je krijgt een PDF, die direct beschikbaar is na je aankoop. Het gekochte document is altijd, overal en oneindig toegankelijk via je profiel.
Tevredenheidsgarantie: hoe werkt dat?
Onze tevredenheidsgarantie zorgt ervoor dat je altijd een studiedocument vindt dat goed bij je past. Je vult een formulier in en onze klantenservice regelt de rest.
Van wie koop ik deze samenvatting?
Stuvia is een marktplaats, je koop dit document dus niet van ons, maar van verkoper Chemist123. Stuvia faciliteert de betaling aan de verkoper.
Zit ik meteen vast aan een abonnement?
Nee, je koopt alleen deze samenvatting voor €17,48. Je zit daarna nergens aan vast.
Is Stuvia te vertrouwen?
4,6 sterren op Google & Trustpilot (+1000 reviews)
Afgelopen 30 dagen zijn er 69052 samenvattingen verkocht
Opgericht in 2010, al 15 jaar dé plek om samenvattingen te kopen