Samenvatting
Samenvatting moleculaire biologie & DNA technologie- MLT2- Hogent
- Instelling
- Hogeschool Gent (HoGent)
Samenvatting + examenvragen uit de les met oplossing
[Meer zien]Voorbeeld 2 van de 36 pagina's
Voorbeeld 2 van de 36 pagina's
In winkelwagenVerkoper
Volgen
Voorbeeld van de inhoud
Hoofdstuk 1: isolatie van nucleinezurenEX: Welk type binding is belangrijk bij pcr om deze 2 strengen uit elkaar te halen?
Waterstofbruggen
ALTIJD van 5’(fosfaat)3’ (OH groep)
RNA= reactiever, minder stabiel door 2’ OH groep
Hairpin
EX: TRNA kunnen herkennen
EX: In welke fase chromosoom?
Mitose-metafase
DNA ISOLATIE = isoleren (zuiveren) v DNA uit cellen
Nodig voor enzymatische ‘down stream’ toepasssing & werking verstoord bij onzuiver staal
HOE cellen openbreken voor DNA isolatie?
Lyse(buffer) afh van staaltype/celstructuur (versch voorbehandeling+ versch componenten)
‘pretreatment’ kan noodzakelijk zijn (voorbereidende stappen)
Plant&bacterie CELWAND (dier: celmembraan)
Gram+ dikkere wand dan -
- Chemisch (toevoegen v stof)
Detergent: SDS (sodium dodecyl sulfaat), maakt celmembraan kapot (vorming micel),
fosfolipiden uithalen (detergent&chaotrope stof = denatureren substraat = beter
voor enzym (proteinase k))
Alkalische buffer: NAOH
- Biologisch (enzym)
Proteinase K: breekt EW/nucleasen af, celmembraan + EW gebonden op NZ
Eigenschap: breed sprectrum, knipt na hydrofobe AZ
Nadeel: actief bij bep temp (50-70°C)
PH optimum = 8
Invloed = GROOT
Activiteit verhoogd bij aanwezigheid detergenten (SDS, Tween-20, Triton X 100) &
chaotrope stoffen (GuHCL, Guanidium-hydrochloride, ethanol, SDS, ureum,fenol,
mgcl2, guanidiumisothiocyanaat GuSCN)
Functie: EW denatureren+ nuclease onschadelijk maken (enzyme dat NZ afbreekt)
Chaotrope stoffen/zout: vorm EW valt uit elkaar, verhoogt entropie in bio systeem
door interferatie met zwakke intermoleculaire kracht (WB, vdwaalskracht, hydrofobe
effecten 2 hydrofobe mol. hebben aantrekking (aggregeren) dus moeten daar alle
H20 voor wegduwen, chaotroop inhibeert dit)
Effect op biomol. = zelfde als functie Proteinase K + verbreken watermantel DNA
(chaotroop trekt ook aan H2O en is sterker dus wint) + membraanpermeabiliteit
verhogen door verstoring hydrofoobeffect
, Lysozym: bacterie, hydroliseert peptidoglycaan (=maakt kapot) (bacteriele wand) +
breekt celwand van gram+ (Gr – heeft extra membr). Zit in traanvocht
- Fysisch (temp, druk, straling)
Warmte, osmose
- Mechanisch (beweging)
Vortex, soniceren
- Combinatie v versch methodes
Humane cel: proteinase K + detergent + warmte
Bacterie : NAOH + warmte
EX: Welke lading DNA ?
Negatief – (trekt H20 aan)
HOE zuiveren we DNA? Hoe verwijderen we overige celcomponenten?
Voordeel= sneller, gemakkelijker, beter bewaren, stabieler
Na cellyse, lysaat: DNA(zonder EW)/RNA in waterige opl, afbraakmateriaal v cel
(gedenatureerde EW, suikers), detergent, proteinase K, chaotroop
Versch opties:
- Phenol/chloroform extractie (vroeger)
Nadeel: schadelijke productie, duurt lang, moet heel nauwkeurig, isopropanol
precipatie
Voordeel: zeer zuiver dna, goede opbrengt
Versch fasen: waterig (DNA), interfase (celdebris), organische (proteinen EW, lipiden
VETTEN)
Isopropanol toevoegen, centrifuge, DNA slaat neer, bovenste vloeistof weg
- Boom extractie (nu) (kolomchromatografie)
Adsorptie van DNA op silicagel= silica-, samenstelling buffer: hoge zout conc &
chaotroop agens. zoutbrug+
Verwijderen contaminanten= wassen(ethanol & hoge zoutconc), flow through.
Elutie DNA (eluaat) = buffer: laag zoutconc, Tip: membraan goed drogen (GEEN
ethanol)
- Silica membraan technologie (gemakkelijk) voordeel: snel, minder schadelijk,
zuiver+geconcentreerd DNA, makkelijk te automatiseren.
Voordelen van het kopen van samenvattingen bij Stuvia op een rij:
√ Verzekerd van kwaliteit door reviews
Stuvia-klanten hebben meer dan 700.000 samenvattingen beoordeeld. Zo weet je zeker dat je de beste documenten koopt!
Snel en makkelijk kopen
Je betaalt supersnel en eenmalig met iDeal, Bancontact of creditcard voor de samenvatting. Zonder lidmaatschap.
Focus op de essentie
Samenvattingen worden geschreven voor en door anderen. Daarom zijn de samenvattingen altijd betrouwbaar en actueel. Zo kom je snel tot de kern!
Veelgestelde vragen
Wat krijg ik als ik dit document koop?
Je krijgt een PDF, die direct beschikbaar is na je aankoop. Het gekochte document is altijd, overal en oneindig toegankelijk via je profiel.
Tevredenheidsgarantie: hoe werkt dat?
Onze tevredenheidsgarantie zorgt ervoor dat je altijd een studiedocument vindt dat goed bij je past. Je vult een formulier in en onze klantenservice regelt de rest.
Van wie koop ik deze samenvatting?
Stuvia is een marktplaats, je koop dit document dus niet van ons, maar van verkoper emmahespeels. Stuvia faciliteert de betaling aan de verkoper.
Zit ik meteen vast aan een abonnement?
Nee, je koopt alleen deze samenvatting voor €7,59. Je zit daarna nergens aan vast.
Is Stuvia te vertrouwen?
4,6 sterren op Google & Trustpilot (+1000 reviews)
Afgelopen 30 dagen zijn er 52510 samenvattingen verkocht
Opgericht in 2010, al 14 jaar dé plek om samenvattingen te kopen