Theoretische achtergrond van het project
In het onderzoek naar het alcoholgehalte in het bloedplasma van de bestuurders wordt de hoeveelheid alcohol
in het bloed bepaald in promille. Promillages worden gebruikt bij kleine waardes. In het verkeer worden
alcoholpromillages gebruikt, deze promillages geven aan hoeveel procent alcohol een bestuurder in zijn bloed
mag hebben. Omdat dit een heel klein percentage is worden er promillages gebruikt om het gemakkelijker te
maken. Het gebruik van alcohol verminderd de rijvaardigheid, waardoor er sneller een verkeersongeval plaats
kan vinden. Om deze reden zijn er regels gesteld aan het toegestane promillage in het verkeer.
Voor beginnende bestuurders is het toegestane promillage in het verkeer 0,2 promille. Voor ervaren bestuurders
is het toegestane promillage in het verkeer 0,5 promille. Onder ervaren bestuurders worden bestuurders
verstaan die langer dan 5 jaar in bezit zijn van een rijbewijs.
Tijdens het onderzoek naar het alcoholgehalte in het bloedplasma wordt er verwacht dat het promillage tussen
de 0 en 6 promille ligt. Bij 6 promille alcohol in het bloed raakt iedereen in coma. Vandaar dat het promillage
niet hoger kan zijn dan 6 promille.
Het bloedplasma van de bestuurders moet eerst geextraheerd worden voor het kan worden geinjecteerd in de
gaschromatograaf.
Een extractie is een scheidingsmethode die stoffen kan onderscheiden op basis van chemische eigenschappen Er
zijn meerdere soorten extracties zoals een vloeistof-vloeistof extractie of een vaste stof-vloeistof extractie. Deze
laatste een vaste stof-vloeistof extractie wordt gebruikt in het onderzoek van het alcoholgehalte van het
bloedplasma. Bij een vaste stof-vloeistof extractie zal de extractievloeistof samen komen met de vaste stof en
neemt de kleinste deeltjes mee in de vloeistof. Je krijgt dan een vloeistof die toch eigenschappen van de vaste
stof bevat. De extractie wordt in het onderzoek uitgevoerd met NaCl.
Met behulp van een gaschromatograaf kan uit de area van de piek van ethanol in het chromatogram de
hoeveelheid promille berekend worden.
Gaschromatografie is een vorm van chromatografie waarbij stoffen in een gas of dampfase worden gescheiden
op hun selectieve verdeling tussen de stationaire en de mobiele fase. Scheiding vindt plaats op verschil in
kookpunt en/of affiniteit met de mobiele fase.
Bij de injectie wordt gebruik gemaakt van een Hamilton spuit. Bij een HPLC wordt een stompe punt gebruikt,
maar bij een GC een scherpe punt. Als er een gas wordt geïnjecteerd moet dit langzaam gebeuren. Bij een
vloeistof moet de injectie juist snel gebeuren. In het injectieblok is de temperatuur hoger dan het kookpunt van
de componenten, hierdoor verdampt het monster. Het monster wordt gesplitst in het injectieblok, waardoor
slechts een deel van het monster de kolom in gaat. De mobiele fase is een draaggas om het monster door de
kolom heen te leiden. Het draaggas is een inert gas, zoals stikstof, waterstof of helium.
Component met het laagste kookpunt (vloeistof) of hoogste dampdruk (gas) zal als eerste de kolom uit
komen. De stof met het laagste kookpunt zal namelijk als eerst verdampen. De stationaire fase en de mobiele
fase verschillen in polariteit, waardoor componenten van een mengsel zich verschillend verdelen over de
mobiele en stationaire fase. Verandering in de samenstelling van het gas wordt gemeten door de detector. Dit
wordt omgezet in een elektrisch signaal. In FID (frame ionisation detector) wordt het gas verbrand. De recorder
registreert het detetectorsignaal en maakt er een chromatogram van. Hoe langer de retentietijd, hoe langer de
component in de kolom is geweest. Hoe groter het oppervlak van de piek, hoe groter de concentratie van de
component in de stof. In het experiment van het alcoholgehalte in het bloedplasma van de bestuurders wordt
de hoeveelheid ethanol bepaald door het piekoppervlak van ethanol in het monster te berekenen t.o.v. het
piekoppervlak van een zelf in bekende concentratie toegevoegde andere stof (b.v. propanol of butanol), en dat
vervolgens te vergelijken met standaardoplossingen van ethanol in plasma. Deze methode wordt de interne
standaardmethode genoemd.
Na het onderzoek naar het alcoholgehalte in het bloedplasma wordt ook nog een levercoupe van bestuurder 1
onderzocht. Er wordt gekeken of er aan de lever schade te zien is en daaruit kan dan vervolgens bepaald
worden of de bestuurder overmatig gebruik maakte van alcohol.
Voor het lichaam is alcohol een giftige stof.
Alle vreemde en giftige stoffen uit het bloed worden afgebroken door de lever. De afbreekfunctie raakt
verstoord door overmatig alcoholgebruik. Als er jarenlang te veel wordt gedronken, kan dit uiteindelijk leiden
tot levercirrose. Levercirrose is meestal uiteindelijk een dodelijke ziekte.
, Leververvetting is een stapeling van vet in de lever. De lever speelt een belangrijke rol bij de
vetstofwisseling. Vervetting van de lever wordt ook wel steatose genoemd. Leververvetting is een veel
voorkomende aandoening. Het ontstaat door een ongezonde voeding en leefstijl. Hierdoor raakt de
vetstofwisseling in het lichaam verstoord en hoopt vet zich op in de buikorganen, waaronder de lever. De
stofwisseling van de lever verandert ook waardoor er meer vet in de levercellen terecht komt. Als gevolg hiervan
wordt de lever vet. Als er langere tijd sprake is van vervetting in de lever kan dit leiden tot levercirrose.
Leververvetting is dus een voorstadium van levercirrose. Langdurige leververvetting kan overgaan in een
ontsteking van de lever, ook wel alcoholische hepatitis genoemd. Dit kan weer over gaan in leverfibrose en
uiteindelijk levercirrose.
Levercirrose is zeer ernstige schade aan de lever. Bij levercirrose is er zoveel littekenweefsel aanwezig in de
lever, dat dit de structuur van de lever heeft aangetast. Dit wordt ook wel ‘verlittekening van de lever’ genoemd.
Hierdoor gaan levercellen eerst ontsteken en daarna sterven ze af. De afgestorven levercellen worden
vervolgens vervangen door littekenweefsel. De lever raakt steeds meer beschadigd en gaat steeds minder
goed werken. Om het functieverlies van de lever te compenseren, gaan de gezonde levercellen zich delen. Bij
beginnende levercirrose kan de lever daardoor eerst groter worden. In een later stadium wordt de lever
juist weer kleiner. Als er te veel gezond leverweefsel verdwijnt en het bloed niet meer goed door de lever kan
stromen, ontstaan er ernstige problemen. Als levercirrose in een vroeg stadium wordt vastgesteld, kan er nog
een herstel van de leverfunctie optreden en kunnen complicaties worden voorkomen. Een alcoholverbod en
goede voedingsadviezen om ondervoeding tegen te gaan en de spiermassa op pijl te houden, kunnen dan
helpen. Als de oorzaak van levercirrose niet te behandelen is, kan de levercirrose zich steeds verder uitbreiden.
Uiteindelijk kan levercirrose dan tot leverfalen leiden. Een voor stadium van levercirrose is leverfibrose. Dit is
ook verlittekening van de lever, maar dan in mindere mate. Leverfibrose ontstaat als de lever langere tijd
ontstoken is geweest.
Om de levercoupes te kunnen bekijken onder de microscoop moeten ze eerst worden gekleurd, zodat
bepaalde weefsels eenzelfde kleur krijgen en daardoor kunnen de verschillende weefsels onder de microscoop
makkelijk onderscheiden worden. Dan kan er ook worden bekeken of er schade is aan de lever en of de
bestuurder dus overmatig gebruik maakte van alcohol.
Voordat de kleuringen uitgevoerd kunnen worden moeten de levercoupes van paraffine ontdaan worden en
gedehydrateerd worden. Onvolledige verwijdering van paraffine kan een slechte verkleuring veroorzaken. Er zijn
geen vlekken die kunnen worden aangebracht op weefsels die paraffine bevatten. Er wordt dus voor de
kleuringen altijd begonnen met deparafineren.
Aangezien het projectgroepje uit 3 studenten bestaat, zijn er drie kleuringen uitgekozen. De kleuringen die
gekozen zijn, zijn van Gieson kleuring, Periodic Acid Schiffs kleuring en Haematoxylin and Eosin kleuring.
Van Gieson, ook bekend als Haematoxylin Van Gieson (HVG), wordt gebruikt om onderscheid te maken tussen
collageen en gladde spieren in tumoren en om de toename van collageen bij ziekten aan te tonen.
Tabel 1: De kleur van verschillende weefsels na Van Gieson kleuring.
Kernen Blauw/zwart
Collageen Felrood
Cytoplasma, spieren, fibrine en rode bloedcellen Geel
Periodic acid Schiffs kleurstof wordt gebruikt voor het aantonen van glycogeen. Weefselsecties worden eerst
geoxideerd door periodiek zuur. Het oxidatieve proces resulteert in de vorming van aldehydegroeperingen door
splitsing van koolstof-koolstofbindingen. Er moeten vrije hydroxylgroepen aanwezig zijn om oxidatie te laten
plaatsvinden. De oxidatie is voltooid als het aldehydestadium is bereikt. De aldehydegroepen worden
gedetecteerd door het Schiffs-reagens. Een kleurloze, onstabiele dialdehydeverbinding wordt gevormd en
vervolgens omgezet in het gekleurde eindproduct door herstel van de chinoïde chromofore groepering.
Tabel 2: De kleur van verschillende weefsels na Periodic acid Schiffs kleuring.
Voordelen van het kopen van samenvattingen bij Stuvia op een rij:
Verzekerd van kwaliteit door reviews
Stuvia-klanten hebben meer dan 700.000 samenvattingen beoordeeld. Zo weet je zeker dat je de beste documenten koopt!
Snel en makkelijk kopen
Je betaalt supersnel en eenmalig met iDeal, creditcard of Stuvia-tegoed voor de samenvatting. Zonder lidmaatschap.
Focus op de essentie
Samenvattingen worden geschreven voor en door anderen. Daarom zijn de samenvattingen altijd betrouwbaar en actueel. Zo kom je snel tot de kern!
Veelgestelde vragen
Wat krijg ik als ik dit document koop?
Je krijgt een PDF, die direct beschikbaar is na je aankoop. Het gekochte document is altijd, overal en oneindig toegankelijk via je profiel.
Tevredenheidsgarantie: hoe werkt dat?
Onze tevredenheidsgarantie zorgt ervoor dat je altijd een studiedocument vindt dat goed bij je past. Je vult een formulier in en onze klantenservice regelt de rest.
Van wie koop ik deze samenvatting?
Stuvia is een marktplaats, je koop dit document dus niet van ons, maar van verkoper Nettedebruijn. Stuvia faciliteert de betaling aan de verkoper.
Zit ik meteen vast aan een abonnement?
Nee, je koopt alleen deze samenvatting voor €5,49. Je zit daarna nergens aan vast.