Experiment 1: immunochemie
- Biotinyleren van een antigen, opzuiveren, proteïne bepaling
- Opstellen van een standaardcurve
Men gaat de concentratie bepalen van 2 onbekende stalen dmv EIA (= enzym immuno assay)
Soort EIA = hier: competitief indirect heterogeen systeem:
- Competitief: ongelabelde Ag moet in competitie gaan met het gelabeld Ag* voor de
bindingsplaats op het Ab
o Ongelabelde analyt in het testmonster wordt gemeten door zijn vermogen om te
concurreren met gelabeld Ag voor een beperkt aantal Ab bindingsplaatsen
- Niet-competitief: Het reactiemengsel omvat typisch een overmaat gemerkt antilichaam
- Indirect: wel een secundair antilichaam
- Direct: geen secundair antilichaam
- Heterogeen: ook componenten aanwezig die niet binden aan het antilichaam
- Homogeen: enkel antigenen aanwezig die kunnen binden op het antilichaam
Uitleg:
Je krijgt een plaat met een antilichaam op, dat specifiek is voor het antigen dat je wilt bepalen.
In staal A en B zitten verschillende componenten (ook sommige die niet binden aan je antilichaam
want heterogeen systeem). Het antigen zal dan binden aan het antilichaam maar dit kan je niet zien.
Je zal nu biotine toevoegen dat kan binden op het antigen, en dan een ABC complex toevoegen
(avidine-biotine complex). Dit complex zal op de biotine binden. Op het ABC complex zit een enzym:
horse radish peroxidase.
Dan ga je een substraat (kleurloos) toevoegen. Waneer dit bindt met het enzym wordt er een
gekleurd product gevormd. Dus wanneer het antigen aanwezig is, zal er een kleuring te zien zijn.
Deze kleur is echter niet stabiel, dus we voegen er nog een stof aan bij waardoor het stabiel geel
wordt.
We willen echter onze eigen onbekenden niet aanpassen, en ze zijn bovendien ook heterogeen.
Daarom zullen we met een aparte stock werken, met gekende concentratie, van hetzelfde antigen.
Deze zullen we dan wel biotinyleren.
We laten dan onze onbekende A en B in competitie treden met het antigen met gekende
concentratie dat wel gebonden is aan biotine.
Voordelen van het kopen van samenvattingen bij Stuvia op een rij:
Verzekerd van kwaliteit door reviews
Stuvia-klanten hebben meer dan 700.000 samenvattingen beoordeeld. Zo weet je zeker dat je de beste documenten koopt!
Snel en makkelijk kopen
Je betaalt supersnel en eenmalig met iDeal, creditcard of Stuvia-tegoed voor de samenvatting. Zonder lidmaatschap.
Focus op de essentie
Samenvattingen worden geschreven voor en door anderen. Daarom zijn de samenvattingen altijd betrouwbaar en actueel. Zo kom je snel tot de kern!
Veelgestelde vragen
Wat krijg ik als ik dit document koop?
Je krijgt een PDF, die direct beschikbaar is na je aankoop. Het gekochte document is altijd, overal en oneindig toegankelijk via je profiel.
Tevredenheidsgarantie: hoe werkt dat?
Onze tevredenheidsgarantie zorgt ervoor dat je altijd een studiedocument vindt dat goed bij je past. Je vult een formulier in en onze klantenservice regelt de rest.
Van wie koop ik deze samenvatting?
Stuvia is een marktplaats, je koop dit document dus niet van ons, maar van verkoper Bi0med. Stuvia faciliteert de betaling aan de verkoper.
Zit ik meteen vast aan een abonnement?
Nee, je koopt alleen deze samenvatting voor €3,49. Je zit daarna nergens aan vast.