Samenvatting
Samenvatting NAD HC10
- Vak
- NAD
- Instelling
- Hogeschool Leiden (HSL)
Samenvatting NAD hoorcollege 10
[Meer zien]Voorbeeld 3 van de 9 pagina's
Voorbeeld 3 van de 9 pagina's
In winkelwagengesponsord bericht van onze partner
Voorbeeld van de inhoud
NAD HC10 Methylation specific PCRA novel assay for methylation status of CpG islands.
- PNAS, 1996; vol 93, pp 9821-9826
- Recognition of methylation patterns
- In paraffin-embedded coupes
- Pure DNA
- CpG islands in neoplasia
- Imprinted genes
- X-chromosomal genes
Historically
- Methylation occurs in higher order eukaryotes to regulate gene expression
- In lower organisms: protection against cleavage by invading organisms
- Before 1998:
o Restriction analysis, southern blot, input 5 μg DNA
o Restriction analysis, PCR based on non-cut fragments
o Problem: false-positives, insensitive method, PCR picks up also partially digested preps!
Old method
After restriction
- Running on gel
- Southern blotting
- Measure size of fragments
,New method, MSP: PCR based MSP is Methylation Specific PCR
- Requires much less DNA; methylated DNA detected at 0,1% of total DNA
- Amounts as low as 50 pg detected by PCR
- More sensitive than earliers methods
- No radioactivity (at that time an advantage!)
- No sequencing (may be done of course for confirmation of results)
Diagnosis Prader-Willi syndrome and Angelman syndrome
- MSP used not only for cancer diagnosis
- Both syndromes PW and AS diagnosed routinely with MSP
- Brain syndromes, mental retardation, insomnia, high appetite, obesistas
- Incidence 1:15000 births
- Cause of the disease in Methylation pattern
PW and AS Genetic causes
The method
- CpG (CG) often in promoter regions of genes
- Methylation of C
- Methylation leads to inhibition of transcription of the gene
- C is deaminatied to T: via sodium bisulfite The not methylated C becomes a T
- Methylated C is resistant
- PCR on isolated, bisulfite treated DNA
- Primers specific for different strands (with or without C)
, From cytosine to uracil
- Treat with sodium bisulphite at low pH
- Hydrolytic deamination
- Alkalic desulphonation
It starts with good primer design
- Specific software
- Primer3
- Methprimer
Voordelen van het kopen van samenvattingen bij Stuvia op een rij:
Verzekerd van kwaliteit door reviews
Stuvia-klanten hebben meer dan 700.000 samenvattingen beoordeeld. Zo weet je zeker dat je de beste documenten koopt!
Snel en makkelijk kopen
Je betaalt supersnel en eenmalig met iDeal, creditcard of Stuvia-tegoed voor de samenvatting. Zonder lidmaatschap.
Focus op de essentie
Samenvattingen worden geschreven voor en door anderen. Daarom zijn de samenvattingen altijd betrouwbaar en actueel. Zo kom je snel tot de kern!
Veelgestelde vragen
Wat krijg ik als ik dit document koop?
Je krijgt een PDF, die direct beschikbaar is na je aankoop. Het gekochte document is altijd, overal en oneindig toegankelijk via je profiel.
Tevredenheidsgarantie: hoe werkt dat?
Onze tevredenheidsgarantie zorgt ervoor dat je altijd een studiedocument vindt dat goed bij je past. Je vult een formulier in en onze klantenservice regelt de rest.
Van wie koop ik deze samenvatting?
Stuvia is een marktplaats, je koop dit document dus niet van ons, maar van verkoper Scientist. Stuvia faciliteert de betaling aan de verkoper.
Zit ik meteen vast aan een abonnement?
Nee, je koopt alleen deze samenvatting voor €2,99. Je zit daarna nergens aan vast.
Is Stuvia te vertrouwen?
4,6 sterren op Google & Trustpilot (+1000 reviews)
Afgelopen 30 dagen zijn er 50843 samenvattingen verkocht
Opgericht in 2010, al 14 jaar dé plek om samenvattingen te kopen