Samenvatting

Samenvatting DNA - Technologie II

0 keer verkocht

Vak
DNA - Technologie (V3A018)

Instelling
Katholieke Hogeschool VIVES (VIVES)

In deze cursus komt de recombinant DNA-technologie via de methode van klassieke klonering aan bod. Het belang en gebruik van type I, II, III en speciale restrictie-enzymen in E. coli wordt kort besproken. Het praktisch gebruik van type II restrictie-enzymen wordt uitvoerig bekeken. Vervolgens wo...

[Meer zien]

Voorbeeld 4 van de 82 pagina's

Bekijk voorbeeld

Geupload op 22 januari 2022
Aantal pagina's 82
Geschreven in 2020/2021
Type Samenvatting

cdna
klonering
cdna banken
biotechnologie
expressie cdna in ecoli
vives

Instelling
Katholieke Hogeschool VIVES (VIVES)
Studie
Agro-en Biotechnologie
Vak
DNA - Technologie (V3A018)

€7,99

In winkelwagen

Op verlanglijstje

100% tevredenheidsgarantie
Direct beschikbaar na je betaling
Lees online óf als PDF
Geen vaste maandelijkse kosten

DNA TECHONOLOGIE II
INHOUD

Mutaties en het ontstaan van kanker ................................................................................................................ 6
Kenmerken tumorcellen ................................................................................................................................ 6
Switch van goedaardige tumor naar kwaadaardige tumor.......................................................................... 7
Verwijderen tumoren is niet mogelijk via chirurgie .................................................................................... 7
Proto-oncogenen, oncogenen en tumorsuppressorgenen.............................................................................. 7
Tumormerkers .......................................................................................................................................... 8
Delingsactiviteit wordt beïnvloed door ...................................................................................................... 8
Wordt kanker overgeërfd? ............................................................................................................................ 9
Uitschakelen van tumorsuppressorgenen ...................................................................................................... 9
Onderscheid sporadisch of niet – overgeërfde vorm en familiaal of overgeërfde vorm ............................... 9
Meerstappentheorie (Multi hit theory)........................................................................................................ 10
Aantal tumorsuppressorgenen ................................................................................................................ 11
Aantal oncogenen ................................................................................................................................... 11
Groeiend belang van tumormerkers ............................................................................................................ 12
FOBT (Fecal Occult Blood test) ................................................................................................................. 13
PAP-test (Papanicolaou test) ................................................................................................................... 13
Technieken voor diagnose van moleculaire merkers ................................................................................ 14
Liquid biopsie.............................................................................................................................................. 14
NIPT test ................................................................................................................................................. 15
Doelgerichte therapieën, nieuwe wapens in de strijd .................................................................................. 15
Monoklonale antilichamen ...................................................................................................................... 16
Tyrosine Kinase Inhibitoren (TKI) ............................................................................................................. 17
Voorbeelden van carcinoma’ s .................................................................................................................... 18
Colorectale tumoren (uitleggen + vragen beantwoorden) ........................................................................ 18
Borsttumoren.......................................................................................................................................... 19
Voorbeeldvragen Kanker................................................................................................................................. 19
Is kanker overerfbaar? Motiveer ................................................................................................................. 19
3 meest voorkomende kankers bij mannen en vrouwen .............................................................................. 19
Hoe diagnose voor tumor/kanker stellen? Manieren om tumoren op te sporen + geef alle mogelijke
tumormerkes .............................................................................................................................................. 20
Therapie voor het bestrijden van kanker ..................................................................................................... 20
Op welk vlak werken de geneesmiddelen .................................................................................................... 21
Welke zijn de jongste generatie veelbelovende geneesmiddelen ................................................................. 21

1

, Hoe werken mAB tegen kankers (4 manieren) ............................................................................................. 21
Wat weet je over een oncogen? Geef voorbeelden ..................................................................................... 22
Wat weet je over een tumorsuppresorgen? Geef voorbeelden .................................................................... 22
2 hit-theorie van Knudson ........................................................................................................................... 22
het ontstaan van kanker/tumor is een meerstapsproces. Leg uit ................................................................. 23
Gebruik van E-coli stammen en restrictie-enzymen in klassieke kloneringsmethoden ...................................... 24
Restrictie-enzymen ..................................................................................................................................... 24
3 types van restrictie enzymen ................................................................................................................ 24
Speciale restrictie-enzymen in E. coli ....................................................................................................... 25
Type II restrictie-enzymen ........................................................................................................................... 25
Modifying enzymen ............................................................................................................................. 26
Types van herkende sequenties................................................................................................................... 26
Te onderscheiden knipwijzen ...................................................................................................................... 28
Blunt eindjes ........................................................................................................................................... 28
Sticky eindjes .......................................................................................................................................... 28
Frequentie van voorkomen van restrictieplaatsen ....................................................................................... 28
Invloed van de omgevende sequentie op de knip efficiëntie ........................................................................ 28
Manieren van knippen van de herkende sequentie...................................................................................... 29
Begrippen: Prototype – Isoschizomeer – neoschizomeer ............................................................................. 29
Invloed van methylatie op het knippen van type II restrictie – enzymen....................................................... 30
Dam en Dcm methylatie .......................................................................................................................... 30
CpG en CpNpG methylatie in eukaryoten ................................................................................................. 31
Gebruik van restrictie – enzymen .................................................................................................................... 31
Definitie Unit .............................................................................................................................................. 31
Buffersamenstelling .................................................................................................................................... 31
Temperatuur............................................................................................................................................... 31
Staractiviteit ............................................................................................................................................... 31
Stoppen van de reactie ............................................................................................................................... 32
Knippen van DNA met restrictie – enzymen ................................................................................................. 32
Opstellen van gecombineerde digesten ................................................................................................... 33
Betekenis symbolen............................................................................................................................. 34
Oefeningen staractiviteit – bufferconcentratie ........................................................................................ 34
Staractiviteit ........................................................................................................................................ 34
Bufferconcentratie .............................................................................................................................. 35
Plasmiden ....................................................................................................................................................... 35
Definitie van een plasmide .......................................................................................................................... 35
Structuur plasmide...................................................................................................................................... 36

2

, Antibiotica ’s ........................................................................................................................................... 37
Prokaryotische promotors ....................................................................................................................... 37
Incompatibiliteit.......................................................................................................................................... 38
Gastheerbereik ........................................................................................................................................... 39
Kopijnummer .............................................................................................................................................. 39
E. coli strengen in het labo .............................................................................................................................. 39
E. coli .......................................................................................................................................................... 39
Constructie van een recombinant plasmide via klonering met T4 DNA ligase ................................................... 39
Definitie basale kloneringsvector................................................................................................................. 39
Kloneren in praktijk ................................................................................................................................. 40
Oefeningen ......................................................................................................................................... 41
Constructie van een recombinant plasmide via klonering met topoimerase ..................................................... 42
De TOPO TA kloneringstechniek .................................................................................................................. 42
Positieve selectie CCdb – gen................................................................................................................... 42
Gibson Assembly Cloning ................................................................................................................................ 43
Principe van de techniek ............................................................................................................................. 43
Toepassing Gibson Assembly – Nucleotiden niveau ................................................................................. 44
............................................................................................................................................................... 44
Golden Gate Cloning ....................................................................................................................................... 45
Doel van het kloneren via gateway .............................................................................................................. 45
BP reactie ................................................................................................................................................... 46
LR reactie .................................................................................................................................................... 46
Synthese en klonering van cDNA ..................................................................................................................... 47
Doel cDNA banken ...................................................................................................................................... 47
RNA bereiding ............................................................................................................................................. 47
Bereiding totaal RNA (Stappen kennen + uitleggen) ................................................................................. 47
Isolatie van de Poly A+ fractie = mRNA ........................................................................................................ 49
Afzonderen van mRNA ............................................................................................................................ 49
Synthese van cDNA ......................................................................................................................................... 50
Smart Race cDNA amplification ................................................................................................................... 50
Klonering van cDNA ........................................................................................................................................ 51
Homopolymeer tailing................................................................................................................................. 51
Adaptors ..................................................................................................................................................... 53
Transformatie ................................................................................................................................................. 54
Screenen van de bank ..................................................................................................................................... 54
Klonering van RNA’s die geen poly – A staart dragen ....................................................................................... 54
RACE of Rapid Amplification of cDNA ends ...................................................................................................... 54

3

, 5’ RACE ....................................................................................................................................................... 55
3’ RACE ....................................................................................................................................................... 56
Toepassing Race of cDNA ends (Kunnen op het examen) ............................................................................. 57
Maak het 5’ en 3’ RACE product en kloneer het in de vector Maak zelf de 5’ RACE en 3’ Race producten en
ligeer ze in onderstaande vector (typische examenvraag) ........................................................................ 57
In vitro gekoppelde transcriptie-translatie systemen ....................................................................................... 59
Merkingstechnieken voor het aangemaakt eiwit ......................................................................................... 60
Expressie van gekloneerde genen in E. coli ...................................................................................................... 61
Waarom expressie in E. coli ......................................................................................................................... 61
Decodering van de genetische informatie: transcriptie ............................................................................ 62
Decodering van de genetische informatie : translatie............................................................................... 62
Decodering van de genetische informatie : secundaire modificaties ......................................................... 63
Algemene opbouw en gewenste eigenschappen van een expressievector ................................................... 63
Een expressievector voor expressie in E. coli ............................................................................................ 63
Toegankelijkheid van het ATG codon van de expressievector ................................................................... 64
5’ sticky knipper; voorbeeld NcoI ......................................................................................................... 64
3’ sticky knipper; voorbeeld Kpn I ........................................................................................................ 64
Toegankelijkheid van het eerste gewenste codon van het mature eiwit in het cDNA ................................ 65
Quick Change Site Directed Mutagenese – PCR (Oefeningen kunnen maken) ............................................... 65
Voorbeeld ............................................................................................................................................... 65
Oefening ............................................................................................................................................. 66
Overzicht van veel gebruikte promotors en hun regulatie................................................................................ 68
Belang van reguleerbaarheid....................................................................................................................... 68
Lek – expressie ........................................................................................................................................ 69
Factoren die de finale opbrengst van een eiwit bepalen........................................................................... 69
pET expression vectors................................................................................................................................ 69
Expressie van recombinant eiwit in Pichia pastoris .......................................................................................... 70
Cellulaire oorsprong van het product .......................................................................................................... 70
Expressie in Pichia pastoris .......................................................................................................................... 71
Stabiele integratie van expressieconstructen in het genoom .................................................................... 71
Alcohol oxidase promotor en het Alfa mating signaal............................................................................... 72
Belang codon optimalisatie ..................................................................................................................... 73
Kloonselectie .............................................................................................................................................. 74
Fermentatie ................................................................................................................................................ 74
Multicistronische boodschappers .................................................................................................................... 75
IRES – mechanisme ..................................................................................................................................... 75
2A peptide .................................................................................................................................................. 76

4

Dit zijn jouw voordelen als je samenvattingen koopt bij Stuvia:

Bewezen kwaliteit door reviews

Studenten hebben al meer dan 850.000 samenvattingen beoordeeld. Zo weet jij zeker dat je de beste keuze maakt!

In een paar klikken geregeld

Geen gedoe — betaal gewoon eenmalig met iDeal, creditcard of je Stuvia-tegoed en je bent klaar. Geen abonnement nodig.

Direct to-the-point

Studenten maken samenvattingen voor studenten. Dat betekent: actuele inhoud waar jij écht wat aan hebt. Geen overbodige details!

Veelgestelde vragen

Wat krijg ik als ik dit document koop?

Je krijgt een PDF, die direct beschikbaar is na je aankoop. Het gekochte document is altijd, overal en oneindig toegankelijk via je profiel.

Tevredenheidsgarantie: hoe werkt dat?

Onze tevredenheidsgarantie zorgt ervoor dat je altijd een studiedocument vindt dat goed bij je past. Je vult een formulier in en onze klantenservice regelt de rest.

Van wie koop ik deze samenvatting?

Stuvia is een marktplaats, je koop dit document dus niet van ons, maar van verkoper matissedecaluwe. Stuvia faciliteert de betaling aan de verkoper.

Zit ik meteen vast aan een abonnement?

Nee, je koopt alleen deze samenvatting voor €7,99. Je zit daarna nergens aan vast.

Is Stuvia te vertrouwen?

4,6 sterren op Google & Trustpilot (+1000 reviews)

Afgelopen 30 dagen zijn er 68175 samenvattingen verkocht

Opgericht in 2010, al 15 jaar dé plek om samenvattingen te kopen

Begin nu gratis