100% tevredenheidsgarantie Direct beschikbaar na betaling Zowel online als in PDF Je zit nergens aan vast
logo-home
Eerder door jou gezocht
Eerder door jou gezocht
logo
Samenvatting scheiding en zuivering van biomoleculen €10,29   In winkelwagen
Snel navigeren naar
Voorbeeld
  2.  
  3. Universiteit Antwerpen (UA)
  4.  
  5. Biomedische Wetenschappen
  6.  
  7. Scheiding En Zuivering Van Biomoleculen (1037FBDBIC)

Samenvatting

Samenvatting scheiding en zuivering van biomoleculen
 45 keer bekeken  2 keer verkocht
  • Vak
  • Scheiding En Zuivering Van Biomoleculen (1037FBDBIC)
  • Instelling
  • Universiteit Antwerpen (UA)

Volledige samenvatting scheiding en zuivering van biomoleculen

Voorbeeld 4 van de 34  pagina's

Document informatie

  • 22 februari 2022
  • 34
  • 2020/2021
  • Samenvatting

Onderwerpen

  • celcultivatie
  • celfractionnatie
  • filtratie
  • precipitatie
  • centrifugatie
  • chromatografie
  • ionen
  • electroforese
  • biomoleculen

Geschreven voor

  • Universiteit Antwerpen (UA)
  • Biomedische Wetenschappen
  • Scheiding En Zuivering Van Biomoleculen (1037FBDBIC)
Alle documenten voor dit vak (31)

Verkoper

avatar-seller
angelika0804

Ontvangen beoordelingen

Voorbeeld van de inhoud

Samenvatting Scheiding & zuivering van biomoleculen



1 Inleiding
Biochemie = studie van chemische processen in levende organismen met als doel het begrijpen van
het moleculaire werkingsmechanisme van de cel
 Oplossing = homogeen mengsel van 1 of meerdere substanties in een vloeibare component
 Moleculaire massa (MW) = aantal dalton
 Verdunningen: M1 V1 = M2 V2

Elektrolyten:
 Ionisatie = uiteenvallen van ionen
 Sterke electrolyten: irreversiebele ionisatie omdat ze door ionaire bindingen worden
samengehouden, niet covalente
 Zwakke electrolyten: reversibele ionisatie
o Bv carboxylgroep: O-H is covalent gebonden maar partieel positief + bij afsplitsing
krijg je vrije electronen
 Non-electrolyten: geen ionisatie
Indien zowel sterke als zwakke electrolyten worden gebruikt: hoeveelheid individuele ionen meten:
1 1
( c 1 z 1 +c 2 z 2 +…+ cn z n )=μ= ∑ c z
2 2 2 2
 μ=
2 2
o C = concentratie in molariteit
o Z = lading van individueel ion
o μ of I = ionische sterkte (in M)
o Meervoudige ionen doen de ionische sterkte snel stijgen

Activiteiten en activiteitscoëfficiënten van ioniseerbare componenten
 Ionen zijn geladen en gaan interacties aan met elkaar  beïnvloedt het gedrag van aparte
ionen  daarom beter ionen activiteiten gebruiken
 Ionische sterkte beïnvloedt de effectieve concentratie van ioniseerbare stof waarbij
effectieve concentratie (activiteit = A) in verband staat met nominale concentratie door
afctor = activiteitscoëfficiënt γ
Ax = [X] γx

o Ax = activiteit stof X, (X) = nominale concentratie en γ x de activiteitscoëfficiënt van X

o γ is een maat voor afwijking ionisatiegedrag van de stof

2 Celcultivatie
2.1 Inleiding
Celcultivatie = cellen laten groeien onder gecontroleerde omstandigheden.
Artificieel medium; bestaande uit: nutriënten, geschikt groeioppervlak en ideale condities van
temperatuur, vochtigheid en atmosfeer.
Waarom celcultuur?
 Ethisch  beperkt aantal dierproeven
 Omzeilt complexiteit dier-/orgaan experimenten

Specifieke toepassingen:
 Screenen/testen nieuwe therapeutische compounds
 Relatief eenvoudige, efficiënte en snelle productie van therapeutisch relevante biologische
compounds zoals hormonen, eiwitten, antilichamen
o Recombinant DNA techniek  recombinatie eiwitten

1

,Samenvatting Scheiding & zuivering van biomoleculen


o Complexe geneesmiddelen die niet via chemische synthese kunnen worden
geproduceerd
 Ontwikkeling vaccins
 Fundamenteel onderzoek
 In vitro fertilisatie

Soorten celcultuur:
 Primaire celculturen
o Na eerste subcultuur is de primaire celcultuur een cellijn
o Eindige cellen omdat ze hun senescentie (proliferatiecapaciteit) verliezen.
o Voordelen:
 Reflecteren beter de in vivo situatie
 Behouden normale inverse relatie tussen celgroei en differentiatie
o Nadelen:
 Beperkte levensduur
 Cel-specifieke functies verminderen in functie van tijd
 Kan worden verbeterd door het toevoegen van additieven
 Beperkte reproduceerbaarheid
 Beperkte beschikbaarheid
 Ethisch dossier noodzakelijk bij gebruik humaan materiaal
o Voorbeelden:
 Fibroblasten
 Lymfocyten
 Endotheelcellen
 Niercellen
 Vasculaire gladde spieren
 osteoblasten
 Continue cellijnen
o Afgeleid van tumoren
o Geïmmortaliseerd: via transformatie primaire cellen door introductie oncogenen
o + Hoge reproduceerbaarheid
o - Verlies functionele karakteristieken van normale cel
o Voorbeelden:
 HELA cellen
 Chinese Hamster Ovary cells
 HepG2 humane levertumor
 UMR-106 rat osteosarcoma cellijn
2.2 Basisapparatuur
Recipiënten:
 T flask: 25 cm2 – 175 cm2
 Spinner flask: voor cellen die kunnen groeien in suspensie
 Roller bottle: 1050 cm2
 Celcultuurplaten
 Orgaan explant culturen
 Poreuze membranen
 Artificiële huid
 Microdragers
Laminaire flow
 Steriele condities
 Steriele lucht na passage HEPA filter (high efficiency particulate absorbing)
Incubator

2

,Samenvatting Scheiding & zuivering van biomoleculen


 Groeien en onderhouden celculturen
2.3 Groeikinetiek van cellen
Parameter voor groei: gemiddelde verdubbelingstijd = inverse groeisnelheid
2.4 Groeivoorwaarden
Groeimedium
 Medium voor cultuur boost in vivo omgeving
 Meestal serumhoudend
 Afhankelijk van de cultuur
 Klassieke media worden gebufferd met natriumcarbonaat
 pH controle door regeling pCO2 / fosfaatbuffer
 fenolrood  pH indicator
2.5 Toepassingen
Adherente cellen blijven groeien tot confluentie
 opstarten subculturen
 cellen suspenderen (losmaken: mechanisch/trypsine of andere proteasen)
2.6 Invriezen van cellen
Cryopreservatie
 -196°C  vloeibare stikstof
 Cellen in log-fase
 Toevoegen cryoprotectant
Voordelen:
 Vermindert risico op microbiële contaminatie
 Voorkomt dat alle cellen op elk ogenblik in celcultuur dienen gebracht te worden gehouden
 Mogelijkheid tot experimenten met cellen met consistent aantal passages
 Vermindert risico op genetische drift (evolutionair proces waarbij er een verandering
optreedt in de frequentie van een genvariant) en morfologische veranderingen
2.7 Celtelling
Hemocytometer
 # leefbare cellen/ml = # ongekleurde cellen in n vierkanten/n * verdunning * 10 4
 Trypaanblauw
 Goede celcultuur indien > 90%
Celproliferatietest
 Doel: bepaling celviabiliteit  maat voor celproliferatie
 Kwalitatieve colorimetrische test
 Principe:
o Kleurreactie door omzetting van tetrazoliumzout (MTT 3-(4,5-dimehtylthiazol-2- yl)-
2,5-diphenyltetrazolium, toegevoegd aan celcultuur) in formazan door
mitochondriale enzymes (succinaatdehydrogenase)
o Formazan wordt opgelost in isopropanol of DMSO
→ Intensiteit kleurreactie is evenredig met metabolische activiteit levende cellen
Coulter counter
 Bepaling aantal en grootte partikels en cellen
 Principe:
o Gebaseerd op de detectie van veranderingen in elektrische geleidbaarheid (of
weerstand) wanneer een celbevattende elektrolietenoplossing doorheen een kleine
opening wordt gestuurd.
o Aangezien cellen niet-geleidend zijn zal aldus de effectieve doorsnede van het
geleidingskanaal veranderen wat gemeten wordt als een spanningsverandering
tussen 2 elektroden


3

, Samenvatting Scheiding & zuivering van biomoleculen


3 Celfractionatie
= scheiding en zuivering van cellen
3.1 Zuiveren van cellen
3.1.1 Centrifugatie op gradiënt
 Principe gebaseerd op verschillende dichtheden scheiden
 Dichtheidsgradiënten kunnen worden bekomen door verschillende lagen gradiëntmedia in
een proefbuis op elkaar te plaatsen in een centrifugeerbuis met de zwaarste laag onder- en
de lichtste laag bovenaan.
 Eens evenwicht is bereikt heegt de duur van de centrifugatie geen belang meer
 Bv: lymfocyten
3.1.2 Immunomagnetische scheiding
 Maakt gebruik van paramagnetische korrels (1- 4.5µm)
 De oppervlaktelaag van de korrels bevat hydroxyl- en epoxidegroepen voor het covalent
binden van antilichamen
 Directe methode:
o Primair antilichaam gebonden op magneetkorrel bindt met specifiek antigen op de
cel
 Indirecte methode:
o Antilichamen gericht tegen celspecifieke antigenen worden vooraf op de cellen
gebonden
o Daarna worden magneetkorrels waarop vooraf secundaire antilichamen gericht
tegen de antilichamen op de cellen aan de cellen toegevoegd
 Cellen gebonden aan de magneetkorrels door een antigen-antilichaamreactie worden
gecollecteerd door een magneet aan de zijkant van het celbevattend recipiënt te plaatsen
 Zowel voor de gerichte isolatie van een bepaald celtype als voor het verwijderen van
ongewenste cellen uit een mengsel
3.1.3 Celsortering – Flowcytometrie
Flow cytometrie is een techniek die een multi-parametrische analyse van cellen of deeltjes toelaat
terwijl ze in een vloeistofstroom cel per cel doorheen een laserstraal passeren
 Hierbij kunnen de kenmerken van individuele cellen worden gemeten via hun interactie met
(laser)licht
 Dit laat ook toe om cellen of deeltjes van elkaar te scheiden (flow sorting)/zuiveren op basis
van karakteristieke eigenschappen
Een flow cytometer is opgebouwd uit verschillende componenten:
 Fluïdum
o Starten met single cell suspension
o Vooraf kan aan de cellen een cel-specifiek fluorochroom-geconjugeerd antilichaam
toegevoegd:
o Het fluïdum systeem van de flow cytometer transformeert het staal  een
celsuspensie, in een georganiseerde vloeistofstroom waarin de cellen als het ware
worden ‘opgelijnd’ en er een duidelijke scheiding tussen de cellen is zodat ze één
voor één het analyse- of detectiepunt passeren.
 Deze ‘oplijning’ gebeurt via het principe van de hydrodynamische focussering
 Wanneer deeltjesbevattende vloeistof door een cilinder wordt gestuurd zal
er bij de deeltjes een snelheidsgradiënt ontstaan tengevolge wrijving ter
hoogte van de cilinderwand (viscous drag) waardoor de deeltjes naar het
centrum van de vloeistofstroom worden ‘gesleept’ (dragging)
o Flow chamber: 2 vloeistofbevattende cilinders
 Binnenste bevat het staal



4

Voordelen van het kopen van samenvattingen bij Stuvia op een rij:

Verzekerd van kwaliteit door reviews

Verzekerd van kwaliteit door reviews

Stuvia-klanten hebben meer dan 700.000 samenvattingen beoordeeld. Zo weet je zeker dat je de beste documenten koopt!

Snel en makkelijk kopen

Snel en makkelijk kopen

Je betaalt supersnel en eenmalig met iDeal, creditcard of Stuvia-tegoed voor de samenvatting. Zonder lidmaatschap.

Focus op de essentie

Focus op de essentie

Samenvattingen worden geschreven voor en door anderen. Daarom zijn de samenvattingen altijd betrouwbaar en actueel. Zo kom je snel tot de kern!

Veelgestelde vragen

Wat krijg ik als ik dit document koop?

Je krijgt een PDF, die direct beschikbaar is na je aankoop. Het gekochte document is altijd, overal en oneindig toegankelijk via je profiel.

Tevredenheidsgarantie: hoe werkt dat?

Onze tevredenheidsgarantie zorgt ervoor dat je altijd een studiedocument vindt dat goed bij je past. Je vult een formulier in en onze klantenservice regelt de rest.

Van wie koop ik deze samenvatting?

Stuvia is een marktplaats, je koop dit document dus niet van ons, maar van verkoper angelika0804. Stuvia faciliteert de betaling aan de verkoper.

Zit ik meteen vast aan een abonnement?

Nee, je koopt alleen deze samenvatting voor €10,29. Je zit daarna nergens aan vast.

Is Stuvia te vertrouwen?

4,6 sterren op Google & Trustpilot (+1000 reviews)

Afgelopen 30 dagen zijn er 76462 samenvattingen verkocht

Opgericht in 2010, al 14 jaar dé plek om samenvattingen te kopen

Start met verkopen
€10,29  2x  verkocht
  • (0)
  Kopen