Samenvatting
Summary Theory of the pratical BLM cells - BM10
- Instelling
- Hogeschool Arnhem En Nijmegen (HAN)
Theory of the pratical BLM cells - BM10
[Meer zien]Voorbeeld 2 van de 10 pagina's
Voorbeeld 2 van de 10 pagina's
In winkelwagengesponsord bericht van onze partner
Verkoper
Volgen
Voorbeeld van de inhoud
Theory of the practicalPractical – research aim
- What is the effect of ALCAM-ALCAM interactions on MMP2 activation
- What is the effect of ALCAM-ALCAM interactions on gene expression (ALCAM responsive genes)
Cell culture
- BLM-Cells
o Expressing normal ALCAM
o Over-expressing truncated ALCAM (D1 and D2 domain deleted, dN ALCAM)
o Over-expressing soluble ALCAM (only expressing D1, sALCAM)
- 100% confluent T75 = 7.5 * 10^6 cells
o (= 100.000 cells / cm2 )
- Investigate cell-cell / ALCAM-ALCAM interactions
o Culture @ different densities
o 3D culture → 104 , 105 , 106 cells per collagen gel
o Gene expression analysis → 60% confluent (low) & 200% confluent (high)
Passaging cells
- ~80% density
- Passage 1/5
, Cell culture – passaging adhering cells
- BLM cells: Adherend (dN and S different medium!)
- Remove medium, wash with PBS (do not ‘pipet on top of them’)
- Trypsin (keep at RT), add 1ml, incubate 2-3 min @ 37C
- Add medium with FCS
- Resuspend vigorously
- Transfer to tube
- Count the cells
- Does the number of cells correspond to what you estimated initially?
- Passage at 1/2, 1/5, … (depends on confluency!)
Example T75
- 80 % density, passage 1/5th to a new flask
- All cells were resuspended in 6.5 ml (1,5ml trypsin + 5 ml D10)
- Take 1.3 ml of cell suspension • Place back in the old flask:
- Top off with medium (add ~ 9 ml)
- Devide cell suspension equally over the bottom
CAPS of flasks
- With filter
- Without filter
- Gas exchange! Open cap a bit!
Cell culture – 3D culture
- MMP2 activation requires cell-matrix interactions
o Pro-MMP2 and active MMP2
- type I Collagen present
- Wells plate with collagen and on top you grow cells
o Cells grow on collagen
- Investigate MMp2 activation
- MMP2 is expressed in probe form pro-MMP2
o For activation pro domain needs to be cut of
- Activation requires ECM interaction with collagen
MMP2
- Matix metallo protease MMP2 is a protease
- Cleves extra cellular matrix CLEVEAGE collagen
- Calcium dependent
- Substrate gelatin (derived form collagen)
Voordelen van het kopen van samenvattingen bij Stuvia op een rij:
Verzekerd van kwaliteit door reviews
Stuvia-klanten hebben meer dan 700.000 samenvattingen beoordeeld. Zo weet je zeker dat je de beste documenten koopt!
Snel en makkelijk kopen
Je betaalt supersnel en eenmalig met iDeal, creditcard of Stuvia-tegoed voor de samenvatting. Zonder lidmaatschap.
Focus op de essentie
Samenvattingen worden geschreven voor en door anderen. Daarom zijn de samenvattingen altijd betrouwbaar en actueel. Zo kom je snel tot de kern!
Veelgestelde vragen
Wat krijg ik als ik dit document koop?
Je krijgt een PDF, die direct beschikbaar is na je aankoop. Het gekochte document is altijd, overal en oneindig toegankelijk via je profiel.
Tevredenheidsgarantie: hoe werkt dat?
Onze tevredenheidsgarantie zorgt ervoor dat je altijd een studiedocument vindt dat goed bij je past. Je vult een formulier in en onze klantenservice regelt de rest.
Van wie koop ik deze samenvatting?
Stuvia is een marktplaats, je koop dit document dus niet van ons, maar van verkoper linngeubbels. Stuvia faciliteert de betaling aan de verkoper.
Zit ik meteen vast aan een abonnement?
Nee, je koopt alleen deze samenvatting voor €5,49. Je zit daarna nergens aan vast.
Is Stuvia te vertrouwen?
4,6 sterren op Google & Trustpilot (+1000 reviews)
Afgelopen 30 dagen zijn er 66579 samenvattingen verkocht
Opgericht in 2010, al 14 jaar dé plek om samenvattingen te kopen