100% tevredenheidsgarantie Direct beschikbaar na je betaling Lees online óf als PDF Geen vaste maandelijkse kosten
logo-home
Samenvatting moleculaire- en biochemische technieken course 5 blok 1 €6,49
In winkelwagen

Samenvatting

Samenvatting moleculaire- en biochemische technieken course 5 blok 1

 0 keer verkocht

moleculaire- en biochemische technieken lessen gegeven in course 5 blok 1

Voorbeeld 2 van de 11  pagina's

  • 1 augustus 2022
  • 11
  • 2020/2021
  • Samenvatting
Alle documenten voor dit vak (10)
avatar-seller
linngeubbels
Samenvatting moleculaire- en biochemische technieken



PCR

- Kan alleen op DNA
- DNA replicatie in een epje
- Master mix (pipeteer mix)
o DNA primers (forward en reverse)
o DNA template
o Nucleotiden nodig (DNTP)
o Cofactoren nodig (MgCl2)
(Magnesion is de cofactor)
o DNA polymerase
o Buffer voor stabiele pH
- PCR reactie
o Aan 3 accent einde gaat DNA
polymerase nieuwe nucleotiden
koppelen
o Van 5 naar 3 accent



Stappen van de PCR

- Stap 1: denaturatie
o Hoge temperatuur omdat zo de dubbele helix loslaat
o 95 graden
- Stap 2: Annealing
o Forward en reverse primer kunnen gaan binden
o Van 5 naar 3 kan DNA polymerase nieuwe nucleotiden gaan binden
o 50 tot 60 graden
 5 graden onder smelttemperatuur van primer
- Stap 3: Elongatie
o Synthetiseren van DNA
o TAG polymerase
o 72 graden
o Tijd berekenen


DNA template

- Bevat DNA fragmenten die amplified kunnen worden
o Plasmide DNA
 Bacterieel
o Genomisch DNA
 Bevat intronen
o cDNA
- Template DNA niet te veel en niet te weinig toevoegen
o Geen of teveel reacties
- DNA is helemaal gedenatureerd om het enkelstrengs te maken

, DNA polymerase

- TAG DNA polymerase
o DNA polymerase die geïsoleerd is uit thermus aquaticus
o Nadeel: Heeft geen proofreading
- Pfu DNA polymerase
o Heeft wel proofreading
o Handig als er een gen tot expressie wordt gebracht


Forward en reverse primers

- Nodig om DNA polymerase van nieuwe 3 accent einde te voorzien
- Goede primers nodig
o Primer plaatsen aan het 3 accent einde van het DNA
o Bovenste streng reverse primers
o Onderste streng forward primer
- Primers 18 tot 24 nucleotides lang
o Minder is niet specifiek
o Annealing temperatuur zorgt er voor dat de primer alleen specifiek zal binden
- Condities
o CG content van 50 tot 60%
o 3 einde moet een C of G bevatten
o Niet langer dan 24 nucleoides
o Verschil tussen primers 1 tot 2kb
o Verschillende smelttemperaturen binnen 5 graden verschil van elkaar
o Smelttemperatuur onder 70 graden
- Smelttemperatuur
o Temperatuur die nodig is om de DNA duplex uit elkaar te halen
 Primer van template af te halen
o Bepaald door aantal binden AT en GC
 GC kost meer energie en hogere smelttemperatuur
 AT kost minder energie
o Tm= 4(C+G) + 2(A+T)
o Het maximale temperatuurverschil mag 5 graden zijn
o Annealing temperatuur
 Ta= Tm – 2 tot 5 graden


Primers

- Te korte primer
o Niet specifiek genoeg
o Grote kans op meer hechtingsplaatsen
- Te lange primer
o Dan wordt de smelttemperatuur hoger
o Hogere annealing temperatuur
o Niet handig omdat deze op elongatie temperatuur gaat lijken
- Primer design

Dit zijn jouw voordelen als je samenvattingen koopt bij Stuvia:

Bewezen kwaliteit door reviews

Bewezen kwaliteit door reviews

Studenten hebben al meer dan 850.000 samenvattingen beoordeeld. Zo weet jij zeker dat je de beste keuze maakt!

In een paar klikken geregeld

In een paar klikken geregeld

Geen gedoe — betaal gewoon eenmalig met iDeal, creditcard of je Stuvia-tegoed en je bent klaar. Geen abonnement nodig.

Direct to-the-point

Direct to-the-point

Studenten maken samenvattingen voor studenten. Dat betekent: actuele inhoud waar jij écht wat aan hebt. Geen overbodige details!

Veelgestelde vragen

Wat krijg ik als ik dit document koop?

Je krijgt een PDF, die direct beschikbaar is na je aankoop. Het gekochte document is altijd, overal en oneindig toegankelijk via je profiel.

Tevredenheidsgarantie: hoe werkt dat?

Onze tevredenheidsgarantie zorgt ervoor dat je altijd een studiedocument vindt dat goed bij je past. Je vult een formulier in en onze klantenservice regelt de rest.

Van wie koop ik deze samenvatting?

Stuvia is een marktplaats, je koop dit document dus niet van ons, maar van verkoper linngeubbels. Stuvia faciliteert de betaling aan de verkoper.

Zit ik meteen vast aan een abonnement?

Nee, je koopt alleen deze samenvatting voor €6,49. Je zit daarna nergens aan vast.

Is Stuvia te vertrouwen?

4,6 sterren op Google & Trustpilot (+1000 reviews)

Afgelopen 30 dagen zijn er 65863 samenvattingen verkocht

Opgericht in 2010, al 15 jaar dé plek om samenvattingen te kopen

Begin nu gratis
€6,49
  • (0)
In winkelwagen
Toegevoegd