Samenvatting
Samenvatting moleculaire- en biochemische technieken course 5 blok 1
moleculaire- en biochemische technieken lessen gegeven in course 5 blok 1
[Meer zien]Voorbeeld 2 van de 11 pagina's
Voorbeeld 2 van de 11 pagina's
In winkelwagengesponsord bericht van onze partner
Verkoper
Volgen
Voorbeeld van de inhoud
Samenvatting moleculaire- en biochemische techniekenPCR
- Kan alleen op DNA
- DNA replicatie in een epje
- Master mix (pipeteer mix)
o DNA primers (forward en reverse)
o DNA template
o Nucleotiden nodig (DNTP)
o Cofactoren nodig (MgCl2)
(Magnesion is de cofactor)
o DNA polymerase
o Buffer voor stabiele pH
- PCR reactie
o Aan 3 accent einde gaat DNA
polymerase nieuwe nucleotiden
koppelen
o Van 5 naar 3 accent
Stappen van de PCR
- Stap 1: denaturatie
o Hoge temperatuur omdat zo de dubbele helix loslaat
o 95 graden
- Stap 2: Annealing
o Forward en reverse primer kunnen gaan binden
o Van 5 naar 3 kan DNA polymerase nieuwe nucleotiden gaan binden
o 50 tot 60 graden
5 graden onder smelttemperatuur van primer
- Stap 3: Elongatie
o Synthetiseren van DNA
o TAG polymerase
o 72 graden
o Tijd berekenen
DNA template
- Bevat DNA fragmenten die amplified kunnen worden
o Plasmide DNA
Bacterieel
o Genomisch DNA
Bevat intronen
o cDNA
- Template DNA niet te veel en niet te weinig toevoegen
o Geen of teveel reacties
- DNA is helemaal gedenatureerd om het enkelstrengs te maken
, DNA polymerase
- TAG DNA polymerase
o DNA polymerase die geïsoleerd is uit thermus aquaticus
o Nadeel: Heeft geen proofreading
- Pfu DNA polymerase
o Heeft wel proofreading
o Handig als er een gen tot expressie wordt gebracht
Forward en reverse primers
- Nodig om DNA polymerase van nieuwe 3 accent einde te voorzien
- Goede primers nodig
o Primer plaatsen aan het 3 accent einde van het DNA
o Bovenste streng reverse primers
o Onderste streng forward primer
- Primers 18 tot 24 nucleotides lang
o Minder is niet specifiek
o Annealing temperatuur zorgt er voor dat de primer alleen specifiek zal binden
- Condities
o CG content van 50 tot 60%
o 3 einde moet een C of G bevatten
o Niet langer dan 24 nucleoides
o Verschil tussen primers 1 tot 2kb
o Verschillende smelttemperaturen binnen 5 graden verschil van elkaar
o Smelttemperatuur onder 70 graden
- Smelttemperatuur
o Temperatuur die nodig is om de DNA duplex uit elkaar te halen
Primer van template af te halen
o Bepaald door aantal binden AT en GC
GC kost meer energie en hogere smelttemperatuur
AT kost minder energie
o Tm= 4(C+G) + 2(A+T)
o Het maximale temperatuurverschil mag 5 graden zijn
o Annealing temperatuur
Ta= Tm – 2 tot 5 graden
Primers
- Te korte primer
o Niet specifiek genoeg
o Grote kans op meer hechtingsplaatsen
- Te lange primer
o Dan wordt de smelttemperatuur hoger
o Hogere annealing temperatuur
o Niet handig omdat deze op elongatie temperatuur gaat lijken
- Primer design
Voordelen van het kopen van samenvattingen bij Stuvia op een rij:
Verzekerd van kwaliteit door reviews
Stuvia-klanten hebben meer dan 700.000 samenvattingen beoordeeld. Zo weet je zeker dat je de beste documenten koopt!
Snel en makkelijk kopen
Je betaalt supersnel en eenmalig met iDeal, creditcard of Stuvia-tegoed voor de samenvatting. Zonder lidmaatschap.
Focus op de essentie
Samenvattingen worden geschreven voor en door anderen. Daarom zijn de samenvattingen altijd betrouwbaar en actueel. Zo kom je snel tot de kern!
Veelgestelde vragen
Wat krijg ik als ik dit document koop?
Je krijgt een PDF, die direct beschikbaar is na je aankoop. Het gekochte document is altijd, overal en oneindig toegankelijk via je profiel.
Tevredenheidsgarantie: hoe werkt dat?
Onze tevredenheidsgarantie zorgt ervoor dat je altijd een studiedocument vindt dat goed bij je past. Je vult een formulier in en onze klantenservice regelt de rest.
Van wie koop ik deze samenvatting?
Stuvia is een marktplaats, je koop dit document dus niet van ons, maar van verkoper linngeubbels. Stuvia faciliteert de betaling aan de verkoper.
Zit ik meteen vast aan een abonnement?
Nee, je koopt alleen deze samenvatting voor €6,49. Je zit daarna nergens aan vast.
Is Stuvia te vertrouwen?
4,6 sterren op Google & Trustpilot (+1000 reviews)
Afgelopen 30 dagen zijn er 50064 samenvattingen verkocht
Opgericht in 2010, al 14 jaar dé plek om samenvattingen te kopen