Moleculaire biologie, maar ook biochemie zijn pittige vakken. Ik raad je zeker mijn samenvatting aan. Tijdens de les noteer ik bijna alles wat de prof zegt en hier selecteer ik achteraf het belangrijkste uit. Hierin is alle essentie in verwerkt. Mijn samenvatting van Biochemie kan je ook op stuvia ...
Biochemie & moleculaire biologie à Frank Claessens
Biomoleculen -> in levende/dode organismen
- proteïnen
- nucleïnezuren
- polysachariden (suikers)
- lipiden
Centraal dogma van de moleculaire biologie
1) Info in DNA
2) DNA moet verdubbeld worden om doorgegeven te worden
3) DNA via transcriptie naar RNA
4) Translatie naar eiwitten
DNA
- Mendel -> erwtenplanten, leeuwenbekjes
-> geeft de benaming aan een gen:
- coderen voor erfelijke eigenschappen
- chromosomen zijn dragen v. genen
à Elk individu heeft twee genen waarvan één wordt doorgegeven aan de volgende generatie
- Gerrod -> alkaptonurie = er oxideert iets in de luier van de baby als
die blootgesteld wordt met lucht
• Er is biochemisch iets mis met de urine (zwart), oorschelpen zwart
Alkaptonurie is een erfelijke ziekte die wordt veroorzaakt door een afwijking in het DNA. Het gaat
om een afwijking in het DNA waardoor het enzym dat homogentisinezuur afbreekt niet of
onvoldoende wordt aangemaakt. Dit enzym heet homogentisinezuuroxidase. Doordat dit enzym
ontbreekt zal homogentisinezuur zich ophopen in de weefsels.
Het gen dat codeert voor homogentisinezuuroxidase heet HGD-gen.De genetische afwijking wordt
overgeërfd door beide ouders. Dit wordt ‘autosomaal recessieve overerving’ genoemd. Hierbij
hebben de ouders meestal zelf geen klachten omdat ze ook nog een gezonde versie van het gen
hebben. Maar bij het kind die van allebei de ouders de afwijkende versie erft zal de ziekte wel tot
uiting komen
à Bij de mens zijn er ook kenmerken die de wetten van Mendel respecteren
à Een aandoening gedraagt zich als een erfelijk kenmerk
,Goed experiment
• Een duidelijk, testbaar hypothesen
• Een techniek
• Positieve en negatieve controles hebben: is het experiment gelukt?
• Op verschillende manieren tot hetzelfde resultaat komen
SCHEIDINGSTECHNIEKEN
STAP 1
Homogenaat = cellen stuk maken zodat ze hun inhoud lossen -> alles in oplossing krijgen
« soniceren -> weefsel kapot maken door stemvork in weefsel brengen
die trilt met hoge frequentie
« persen
« met detergenten werken : lossen lipiden op -> cellen barsten open
« Pestel
STAP 2
Centrifugatie = partikels in homogenaat scheiden (mitochondrion, kernen,…)
-> centrifugale kracht
• Differentieel centrifugeren à verschillende fracties die elk verschillende
biomoleculen bevatten
1. Rotor draait
2. eerst laag toerental (600g)
3. Kernen in pellet afscheiden van supernatans
4. supernatans op 15 000g
5. supernatans afzonderen van mitochondrion, chloroplasten, … in pellet
6. supernatans op 100 000g
7. …
• Densiteits centrifugatie à verschillende densiteiten
1. Buffer met sucrose in proefbuis
- van beneden naar boven --> van hoge naar lage sucroseconcentratie
--> van hoge naar lage densiteit
à Lagen mengen niet
2. Bovenaan homogenaat brengen met organellen erin
3. Centrifugeren
4. Elke deeltje in homogenaat ondergaat een centrifugale kracht
5. Organellen met de hoogste densiteit komen onderaan, andere daarboven
à Scheiding van organellen op basis van densiteit
, • Cesiumchloride gradiënt centrifuge
1. Proefbuis met homogenaat, gemend met oplossing van cesiumchloride (hoge densiteit)
2. Centrifugeren
3. Cesiummoleculen ondergaan centrifugale kracht
4. Gradiënt van cesiummoleculen
: onderaan hoge cesiumgradiënt
: bovenaan lage cesiumgradiënt
à Alle biomoleculen drijven op basis van densiteit t.o.v. cesiummoleculen
GRIFFITH
à DNA is drager van kenmerken
à streptococcus pneumoniae -> ziekteverwekkend, longziekten (dodelijk voor muizen)
1. Muis injecteren met streptococcus
2. Welk biomolecule is verantwoordelijk voor dodelijk kenmerk?
3. Streptococcus op plaat (smooth kolonie)
4. Één streptococcus overbrengen op andere plaat die uitgroeit tot nieuwe kolonie
5. Zo verder kweken
6. Op een bepaald moment werd er een nieuwe kolonie gevorm (rough kolonie)
Besluit
-> staal smooth kolonie : muis sterft
-> staal rough kolonie : muis sterft niet
-> staal verhitte S kolonie : muis sterft niet
-> verhitte S + R stam in muis injecteren : muis sterft
à de onschadelijk stam is getransformeerd in
de schadelijke variant door contact met de
gedode schadelijke bacterie
à Welke molecule is verantwoordelijk voor het feit dat de ene vorm wel dodelijk is en de andere niet?
1. Homogenaat v. S-bacterie fractioneren in RNA, DNA, vetten & koolwaterstof
2. Elke fractie apart bij R-stam injecteren
Rough met eiwitten uit Sextract -> niks
Rough met lipiden uit Sext -> niks
Rough met suikers uit Sext -> niks
Rough met RNA uit Sext -> niks
Rough met DNA uit Sext -> dood
Besluit
à bacteriën in staat om DNA vanuit hun omgeving op te nemen = transformatie
à DNA is drager voor kenmerk ‘dodelijk’
Kijk wikipedia als experiment nog onduidelijk is
, EXPERIMENT VAN HERSEY-CHASE
1. Bacteriofaag (DNA in eiwitmantel) infecteert bacterie
2. Bacteriofagen gemaakt door herprogrammatie van de bacterie
à waar zit die info om bacteriofagen te maken?
Optie 1 : e.Coli + bacteriofaag samenbrengen
1. Infectie in 5 min.
2. bacteriofaag los van bacterie
3. mengsel centrifugeren
4. bacteriën in pellet, maar bacteriofaag niet
5. pellet in groeimedium brengen voor bacteriën
6. bacteriën gaan dood en maken bacteriofagen
à 5 min. Contact voldoende voor herprogrammatie: gebeurt dat door DNA of eiwitten?
Optie 2 : infectie E.coli + bacteriofagen in aanwezigheid van S35 (radiocatief)
1. Ontstaan bacteriofagen waarvan eiwitten radioactief zijn
optie 3 : E. Coli + bacteriofagen in aanwezigheid van P32
1. Ontstaan bacteriofagen waarvan DNA radioactief is
Eigenlijke Experiment à kijk wikipedia als experiment niet duidelijk is
à 1. E.Coli + bacteriofaag met radioactief eiwit -> infectie
2. Bacteriofaag los van bacterie schudden
3. centrifugeren
4. Pellet met E.Coli & eiwit bacteriofaag in supernaat
à 1. E.coli + bacteriofaag met radioactief DNA -> infectie
2. Bacteriofaag los van bacterie schudden
3. Centrifugeren
4. Bacteriën in pellet & Radioactiviteit zit in pellet (radioactief bacteriofaag DNA zit in bacterie)
Besluit:
DNA bevat de info over de bouwstenen van de bacteriofagen
DNA Deoxyribonucleic acid
• Suiker
• Fosfaat -> 5’-uiteinde Polymeer in de kern (zuur)
• basen DNA-synthese
Ribose/𝛽-D-2-deoxyribose
Voordelen van het kopen van samenvattingen bij Stuvia op een rij:
Verzekerd van kwaliteit door reviews
Stuvia-klanten hebben meer dan 700.000 samenvattingen beoordeeld. Zo weet je zeker dat je de beste documenten koopt!
Snel en makkelijk kopen
Je betaalt supersnel en eenmalig met iDeal, creditcard of Stuvia-tegoed voor de samenvatting. Zonder lidmaatschap.
Focus op de essentie
Samenvattingen worden geschreven voor en door anderen. Daarom zijn de samenvattingen altijd betrouwbaar en actueel. Zo kom je snel tot de kern!
Veelgestelde vragen
Wat krijg ik als ik dit document koop?
Je krijgt een PDF, die direct beschikbaar is na je aankoop. Het gekochte document is altijd, overal en oneindig toegankelijk via je profiel.
Tevredenheidsgarantie: hoe werkt dat?
Onze tevredenheidsgarantie zorgt ervoor dat je altijd een studiedocument vindt dat goed bij je past. Je vult een formulier in en onze klantenservice regelt de rest.
Van wie koop ik deze samenvatting?
Stuvia is een marktplaats, je koop dit document dus niet van ons, maar van verkoper floorokhuijsen. Stuvia faciliteert de betaling aan de verkoper.
Zit ik meteen vast aan een abonnement?
Nee, je koopt alleen deze samenvatting voor €7,99. Je zit daarna nergens aan vast.
