Samenvatting
TIP!Samenvatting van de principes Lambda, PCR, elektroforese en restrictie enzymen
- Instelling
- Hogeschool Leiden (HSL)
Samenvatting van de principes Lambda, PCR, elektroforese en restrictie enzymen
[Meer zien]Voorbeeld 2 van de 7 pagina's
Voorbeeld 2 van de 7 pagina's
In winkelwagengesponsord bericht van onze partner
Voorbeeld van de inhoud
Lambda-PCREen PCR is een techniek die overeenkomt met de DNA-replicatie in een cel. Deze
techniek vindt alleen niet plaats in een cel, maar in een reageerbuisje waarin enkele
DNA-moleculen vermenigvuldigd worden. Net als in een cel zijn er bepaalde
ingrediënten nodig om een PCR-reactie te kunnen laten plaatsvinden. Een PCR-
reactiemix bevat naast het DNA, ook 2 primers, nucleotiden, een PCR-buffer en
DNA-polymerase. Dit is een enzym dat een base plakt aan de complementaire base.
Het enzym moet thermostabiel zijn, omdat het intact moet blijven tijdens het
denatureren, waarbij de temperatuur oploopt tot ongeveer 95°C. Vaak wordt
daarom Taq-DNA-polymerase gebruikt, dit enzym is afkomstig van een bacterie die
in een heetwaterbon leeft. De bacterie en dus de enzymen zijn dan ook bestand
tegen hoge temperaturen.
Een PCR-buffer is nodig om het DNA-polymerase zo goed mogelijk te laten werken.
De buffers bevatten vaak Mg2+-ionen, omdat DNA-polymerase dit als cofactor nodig
heeft om te functioneren. Zonder de ionen kan er geen vermeerdering van DNA
plaatsvinden. Verder bevatten de buffers ook pH-regelaars, ook dit is voor het DNA-
polymerase enzym, bij een optimale pH werkt deze het beste.
Zoals eerder genoemd is, bevat een PCR-reactiemix ook 2 primers, een forward en
reverse primer. Dit zijn kleine stukken enkelstrengs-DNA die binden aan het DNA
wat gedenatureerd is. De primers zijn de start van de DNA-synthese. De forward
primer bindt aan de niet coderende streng en de reverse primer aan de coderende
streng.
DNA is opgebouwd uit nucleotiden, deze zijn dus ook nodig bij een PCR. De
nucleotiden worden ook wel dNTP’s genoemd. Er zijn 4 soorten; Adenine, Cytosine,
Guanine en Thymine. In de PCR-mix moet de concentratie aan nucleotiden niet te
hoog of te laag zijn. Een te hoge concentratie kan ervoor zorgen dat het DNA-
polymerase dan de verkeerde nucleotiden inbouwt. Een te lage concentratie zorgt
ervoor dat de DNA-synthese in snelheid afneemt.
De PCR-cyclus heeft meerdere fases. Voordat het DNA vermenigvuldigt kan worden
moet het eerst gedenatureerd worden. Dit houdt in dat het dubbelstrengs DNA
zodanig wordt verhit dat de waterstofbruggen worden verbroken en het DNA uit
elkaar valt tot 2 enkelstrengs DNA-moleculen. De temperatuur waarbij dit
plaatsvindt is ongeveer 95°C. Deze temperatuur kan wat verschillen, dat ligt aan of
je werkt met kaal, gezuiverd DNA of met ruw, ongezuiverd DNA.
Nadat het dubbelstrengs DNA uit elkaar is gevallen breekt er een nieuwe fase aan.
Dit is de annaelingsfase. In deze fase wordt de temperatuur verlaagd tot ongeveer
50 graden en zal de forward en reverse primer binden aan de 2 enkelstrengs DNA-
moleculen.
, Wanneer dit is gebeurd, breekt de extensiefase aan. De temperatuur wordt weer
verhoogd tot 72 graden, bij deze temperatuur verloopt de DNA-synthese het beste.
De primers worden verlengd in de 5’- naar 3’-richting. Deze 3 fases worden elke
keer herhaalt totdat er 30 tot 40 cycli geweest zijn. Dan wordt er bijna geen DNA
meer gemaakt. De plateaufase breekt dan aan. Wanneer er toch meer PCR-cycli
nog plaatsvinden ontstaan er ongewenste producten, zoals primer-dimers.
Met de PCR-techniek kun je deze veel DNA-moleculen maken. Deze kunnen
vervolgens onderzocht worden. Toepassingen van de techniek zijn bijvoorbeeld het
maken van daderprofielen bij een forensisch onderzoek, waarbij kleine
hoeveelheden DNA van bijvoorbeeld haren of huidcellen worden vermeerderd met
een PCR. Verder kan je hele kleine hoeveelheden DNA bij een infectie aantonen of
om erfelijke ziektes te analyseren. Wij hebben in de praktijk de gevoeligheid
bepaald van de PCR-techniek met het DNA van het lambda-virus. Dit is een virus
dat leeft in en op E.coli. Tijdens de praktijk hebben we het DNA verdunt en bekeken
bij welke hoeveelheid DNA er nog een signaal zichtbaar was.
GEE presentatie
1.1 t/m 1.4, 3.1 t/m 3.2.4, 4.1 tot 4.4.1, 4.5, 4.6, 5.1 en 7.1. Deze stof wordt
getoetst.
Voordelen van het kopen van samenvattingen bij Stuvia op een rij:
Verzekerd van kwaliteit door reviews
Stuvia-klanten hebben meer dan 700.000 samenvattingen beoordeeld. Zo weet je zeker dat je de beste documenten koopt!
Snel en makkelijk kopen
Je betaalt supersnel en eenmalig met iDeal, creditcard of Stuvia-tegoed voor de samenvatting. Zonder lidmaatschap.
Focus op de essentie
Samenvattingen worden geschreven voor en door anderen. Daarom zijn de samenvattingen altijd betrouwbaar en actueel. Zo kom je snel tot de kern!
Veelgestelde vragen
Wat krijg ik als ik dit document koop?
Je krijgt een PDF, die direct beschikbaar is na je aankoop. Het gekochte document is altijd, overal en oneindig toegankelijk via je profiel.
Tevredenheidsgarantie: hoe werkt dat?
Onze tevredenheidsgarantie zorgt ervoor dat je altijd een studiedocument vindt dat goed bij je past. Je vult een formulier in en onze klantenservice regelt de rest.
Van wie koop ik deze samenvatting?
Stuvia is een marktplaats, je koop dit document dus niet van ons, maar van verkoper silke10. Stuvia faciliteert de betaling aan de verkoper.
Zit ik meteen vast aan een abonnement?
Nee, je koopt alleen deze samenvatting voor €6,57. Je zit daarna nergens aan vast.
Is Stuvia te vertrouwen?
4,6 sterren op Google & Trustpilot (+1000 reviews)
Afgelopen 30 dagen zijn er 50064 samenvattingen verkocht
Opgericht in 2010, al 14 jaar dé plek om samenvattingen te kopen