In 1A2 wordt er een VO 'enzymkinetiek' gegeven. In dit VO krijg je verschillende opdrachten die je samen met 2 andere studiegenoten maakt. De uitkomsten van deze opdrachten ga je in een essay verwerken. Dit essay moet voldoen aan de eisen van wetenschappelijk schrijven.
Fosfaat: een competitieve
remmer bij de alkalische fosfatase
activiteit
Voornaam Achternaam (studentennummer)
Samenvatting
De vraagstelling van dit onderzoek is of fosfaat als een competitieve of een non-competitieve
remmer werkt bij het remmen van de alkalische fosfatase activiteit. De probleemstelling bij deze
vraag is dat als fosfaat een non-competitieve remmer is, de enzymbepaling storend bevonden
wordt waardoor de alkalische fosfatase waarde onbetrouwbaar is.
Om dit te kunnen beslissen, wordt productievorming met en zonder de remmer bekeken bij
dezelfde hoeveelheid substraat. In een Lineweaver-Burk plot kan men de verschillen in de
Michaelis-Menten constanten (Km) en de maximale snelheden (Vmax) van de alkalische fosfatase
activiteit zien.
De gevonden meetwaarden van de productievorming met de remmer hebben een Km van 0,2
mmol/L en een Vmax van 140 nmol/min. De gevonden meetwaarden van de productievorming
zonder de remmer hebben een Km van 0,1 mM en een Vmax van 200 nmol/min.
Uit de resultaten wordt de conclusie getrokken dat de alkalische fosfatase activiteit wordt
geremd door een competitieve remmer. Hierdoor zal fosfaat de enzymbepaling niet storen, de
alkalische fosfatase waarde betrouwbaar houden en voor spectrofotometrische bepaling ervan
kunnen worden gebruikt.
Inleiding
Alkalische fosfatase (EC 3.1.3.1) is een enzym dat organische fosfaatesters hydrolyseert. Het in
humaan plasma aanwezige enzym is vooral afkomstig van lever- en galepitheel, en van
osteoblasten (1). De alkalische fosfatase activiteit in plasma is sterk verhoogd in patiënten met
cholestase door galwegobstructie, bij sommige leveraandoeningen en bepaalde
botstofwisselingsziekten. Meting van alkalische fosfatase activiteit in plasma heeft dan ook een
belangrijk rol in de diagnostiek van deze aandoeningen (1).
De spectrofotometrische bepaling van de alkalische fosfatase activiteit is gebaseerd op de
omzetting van het kleurloze p-nitrofenylfosfaat in het geelgekleurde p-nitrofenol. De bepaling
van de hoeveelheid aanwezig enzym vindt plaats onder Vmax condities, hetgeen voor een
Michaelis-Menten enzym betekent bij een substraatconcentratie van minimaal 10 maal de KM
(2). Fosfaat remt de activiteit van alkalische fosfatase, en de hoeveelheid fosfaat in serum
verschilt aanzienlijk van persoon tot persoon, en van patiënt tot patiënt. De vraag is of de
aanwezigheid van fosfaat in het serum de enzymbepaling zodanig stoort dat de alkalische
fosfatase waarde onbetrouwbaar wordt voor de diagnostiek. Dat is met name het geval als
fosfaat een non-competitieve remmer is van alkalische fosfatase. Het doel van dit experiment is
1
Voordelen van het kopen van samenvattingen bij Stuvia op een rij:
Verzekerd van kwaliteit door reviews
Stuvia-klanten hebben meer dan 700.000 samenvattingen beoordeeld. Zo weet je zeker dat je de beste documenten koopt!
Snel en makkelijk kopen
Je betaalt supersnel en eenmalig met iDeal, creditcard of Stuvia-tegoed voor de samenvatting. Zonder lidmaatschap.
Focus op de essentie
Samenvattingen worden geschreven voor en door anderen. Daarom zijn de samenvattingen altijd betrouwbaar en actueel. Zo kom je snel tot de kern!
Veelgestelde vragen
Wat krijg ik als ik dit document koop?
Je krijgt een PDF, die direct beschikbaar is na je aankoop. Het gekochte document is altijd, overal en oneindig toegankelijk via je profiel.
Tevredenheidsgarantie: hoe werkt dat?
Onze tevredenheidsgarantie zorgt ervoor dat je altijd een studiedocument vindt dat goed bij je past. Je vult een formulier in en onze klantenservice regelt de rest.
Van wie koop ik deze samenvatting?
Stuvia is een marktplaats, je koop dit document dus niet van ons, maar van verkoper charlottehopmans2. Stuvia faciliteert de betaling aan de verkoper.
Zit ik meteen vast aan een abonnement?
Nee, je koopt alleen deze samenvatting voor €3,99. Je zit daarna nergens aan vast.
