Samenvatting
Samenvatting Opzuivering van eiwitten prof. Baes
- Vak
- Instelling
Samenvatting opzuivering eiwitten
[Meer zien]Voorbeeld 2 van de 5 pagina's
Voorbeeld 2 van de 5 pagina's
In winkelwagen
In winkelwagen
gesponsord bericht van onze partner
Verkoper
Volgen
Nessie81
Ontvangen beoordelingen
Voorbeeld van de inhoud
VERGELIJKEN CONCENTRATIE GEKEND EIWIT1. Homogenisatie van weefsel
Weefsel aanbrengen in een buffer (vloeistof met bepaalde pH en bepaalde zouten) en
fijn maken met een stamper. Het zal dan in suspensie zijn.
2. Bepalen totale eiwitconcentratie in beide stalen
Spectrofotometrie: we laten licht van een bepaalde golflengte
invallen op een cuvette (buis met oplossing waarin de stof
waarvan we de concentratie willen kennen aanwezig is), het
licht dat uit de cuvette komt langs de andere kant zal een lagere
intensiteit hebben en het toestel meet hoeveel licht erdoor
komt (aan de hand van de lichtabsorptie (wet van Lambert-
Beer))
Bradford assay: Commassiebrilliant blue (bruin) reageert met basische en aromatische
aminozuren en kleurt blauw. Deze kleur kunnen we meten bij golflengte 585 nm. We maken een
concentratiereeks met gekende eiwitconcentraties en kijken met welke absorbantie de
onbekende staal overeenkomt en via lineaire regressie kunnen we de concentratie van ons
originele mengsel afleiden.
Lowry assay: peptidebinding reageert met koper en kleurt blauw
, 3. Detectie specifiek eiwit met antistof
Aangezien eiwitten kleurloos zijn, moeten we ze merken met iets (enzym dat een substraat omzet in
bv. neerslag, fluorescente stof of radioactieve stof) opdat we het eiwit gemakkelijk kunnen zien.
Western blot:
1) Scheiding van de eiwitten volgens grootte
PAGE (polyacrylamide gel elektroforese): we laten het mengsel
onder invloed van een elektrisch veld door een gel migreren
1. Denaturatie van eiwitten (staal opkoken en doorbreken
van zwavelbruggen (mercaptoethanol)
2. Binden aan SDS wat ervoor zal zorgen dat ze enkel op
basis van grootte en niet op lading worden
onderscheiden door hun een gelijkaardige vorm en lading
te geven
3. Eiwitmengsel met gekende concentratie (dat door SDS
omgeven is door negatieve lading) in laantjes in de
polyacrylamide gel aanbrengen (zelfde hoeveelheid
eiwitten: 30 µg) in het apparaat
4. Buffer aanbrengen in bovenste en onderste bakje
5. Aanbrengen ladingsveld
6. Eiwitten omgeven door negatieve lading migreren door
de gel naar positieve pool (kleinere sneller dan grotere)
7. Gel kleuren met commasassiebrilliant blue
8. Eiwitten van de gel over naar een membraan dat de nog steeds negatief geladen
eiwitten goed kan binden
Voordelen van het kopen van samenvattingen bij Stuvia op een rij:
Verzekerd van kwaliteit door reviews
Stuvia-klanten hebben meer dan 700.000 samenvattingen beoordeeld. Zo weet je zeker dat je de beste documenten koopt!
Snel en makkelijk kopen
Je betaalt supersnel en eenmalig met iDeal, creditcard of Stuvia-tegoed voor de samenvatting. Zonder lidmaatschap.
Focus op de essentie
Samenvattingen worden geschreven voor en door anderen. Daarom zijn de samenvattingen altijd betrouwbaar en actueel. Zo kom je snel tot de kern!
Veelgestelde vragen
Wat krijg ik als ik dit document koop?
Je krijgt een PDF, die direct beschikbaar is na je aankoop. Het gekochte document is altijd, overal en oneindig toegankelijk via je profiel.
Tevredenheidsgarantie: hoe werkt dat?
Onze tevredenheidsgarantie zorgt ervoor dat je altijd een studiedocument vindt dat goed bij je past. Je vult een formulier in en onze klantenservice regelt de rest.
Van wie koop ik deze samenvatting?
Stuvia is een marktplaats, je koop dit document dus niet van ons, maar van verkoper Nessie81. Stuvia faciliteert de betaling aan de verkoper.
Zit ik meteen vast aan een abonnement?
Nee, je koopt alleen deze samenvatting voor €3,99. Je zit daarna nergens aan vast.
Is Stuvia te vertrouwen?
4,6 sterren op Google & Trustpilot (+1000 reviews)
Afgelopen 30 dagen zijn er 76462 samenvattingen verkocht
Opgericht in 2010, al 14 jaar dé plek om samenvattingen te kopen