Methoden in biomedisch onderzoek
Hoofdstuk 12: celbiologische methoden
Flow cytometrie
Principe zoals FACS, maar geen scheiding van cellen analyse van merkers
o Doel: bepalen hoeveel % merker de cellen bevatten
Eiwitten van interesse (merkers) worden aangekleurd met fluorescent gelabeld
antilichaam
Intra-cellulaire merkers en/of cel oppervlakte merkers
1 of meerdere merkers worden tegelijk geanalyzeerd (afhankelijk van aantal lasers
en kanalen)
Resultaten worden geplot in histogram of scatter plot voor enkele duizenden cellen
Celproliferatie
BrdU test
o Doel: celproliferatie meten
o Principe: Bromodeoxyuridine (thymidine uit S-fase) toevoegen aan cellen en laten
permeabiliseren, dan een gemerkt anti BrdU antilichaam toevoegen meten
Celleefbaarheid
MTT test
o Doel: aantal levende cellen meten
o Principe: MTT is geel en oplosbaar dat door mitochondriën (dehydrogenase) word omgezet
naat paars onoplosbaar formazan kleuring evenredig met aantal cellen meten door
optische densiteit/absorbantie
Celdood
Tunel test
o Doel: meten van apoptose
o Principe: apoptose gaat gepaard met DNA fragmentatie, kan gedetecteerd worden via
inbouw van Bromo-dUTP (Br-dUTP) in DNA door Terminaal deoxynucleotidyl Transferase
(TdT) detective met fluorescentie of kleuring
Propidium Iodide(PI) flow cytometrie
o Doel: dode cellen tellen
o Principe: PI kan enkel dode cellen binnendringen en word fluorescent na intercalatie met
DNA
Annexine V/Propidium Iodide flow cytometrie
o Doel: levende, vroeg apoptotische en dode cellen onderscheiden en tellen
o Principe: PI kan alleen dode cellen binnendringen, intercaleert met DNA en wordt
fluorescent. Bij start apoptose flipt fosfatidylserine van de cytoplasmatische zijde van de cel
membraan naar de buitenzijde, zodat gelabeld annexine V kan binden aan fosfatidylserine.
Celcyclus
PI flow cytometrie op gepermeabiliseerde cellen
o Doel: cellen in verschillende fasen onderscheiden en tellen
Voordelen van het kopen van samenvattingen bij Stuvia op een rij:
Verzekerd van kwaliteit door reviews
Stuvia-klanten hebben meer dan 700.000 samenvattingen beoordeeld. Zo weet je zeker dat je de beste documenten koopt!
Snel en makkelijk kopen
Je betaalt supersnel en eenmalig met iDeal, creditcard of Stuvia-tegoed voor de samenvatting. Zonder lidmaatschap.
Focus op de essentie
Samenvattingen worden geschreven voor en door anderen. Daarom zijn de samenvattingen altijd betrouwbaar en actueel. Zo kom je snel tot de kern!
Veelgestelde vragen
Wat krijg ik als ik dit document koop?
Je krijgt een PDF, die direct beschikbaar is na je aankoop. Het gekochte document is altijd, overal en oneindig toegankelijk via je profiel.
Tevredenheidsgarantie: hoe werkt dat?
Onze tevredenheidsgarantie zorgt ervoor dat je altijd een studiedocument vindt dat goed bij je past. Je vult een formulier in en onze klantenservice regelt de rest.
Van wie koop ik deze samenvatting?
Stuvia is een marktplaats, je koop dit document dus niet van ons, maar van verkoper elienbloemen. Stuvia faciliteert de betaling aan de verkoper.
Zit ik meteen vast aan een abonnement?
Nee, je koopt alleen deze samenvatting voor €3,49. Je zit daarna nergens aan vast.