Methoden in biomedisch onderzoek
Hoofdstuk 9: spectroscopie
Spectroscopische technieken: inleiding
Spectroscopie= materie bestuderen op basis van interactie met elektromagnetische straling
o Kwalitatieve analyse: kijken welke stoffen aanwezig zijn en eventuele onzuiverheden
o Kwantitatieve analyse: hoeveel is er aanwezig, de concentratie en hoe zuiver de staal is
o Volledig spectrum van licht kan gebruikt worden, verschillende energieniveaus laten toe om
verschillende eigenschappen te onderzoeken
Elektromagnetische straling: golf <-> deeltje
o Bundel van deeltjes (fotonen) met specifieke energie worden verstrooid of gedetecteerd
o Fotonenergie: E = hν = hc/λ = hc ν
o h = constante van Plank (6.63 x 10-34 J.S)
ν = frequentie, λ = golflengte, ν = golfgetal = 1 / λ
Absorptie: attentuatie van de invallende straling door het staal
o Vermindering van de intensiteit
o Komt in meeste spectroscopische technieken voor
Emissie: excitatie door invallende straling, veroorzaakt emissie van straling
o In alle richtingen
o Andere uitgaande golflengte dan golflengte van invallende straling
Interactie met materie
o Absorptie: de stof gaat van lage energie naar een hogere energie toestand (aangeslagen
toestand)
o Enkel fotonen met een energie die precies overeenkomt met het energie verschil tussen 2
niveaus worden geabsorbeerd
o Transities mogelijk tussen energieniveaus
Spectrum= intensiteit/absorptie als functie van energie
o Verschillende stoffen hebben verschillende energieniveaus dus straling zal met een specifieke
energie en dus verschillende manier worden geabsorbeerd
, UV/Vis spectroscopie
Spectrofotometrie: spectroscopie met ultraviolet/zichtbaar licht
o Voornamelijk op basis van energietransities van elektronen
o Kwalitatieve en kwantitatieve analyse mogelijk
Opmeten verminderde lichtintensiteit bij verschillende frequenties als de lichtbundel doorheen het
staal gaat
o Lichtbron: juiste bereik van golflengtes (200-800nm), moet voldoende intens zijn
Halogeen of deuterium lamp zorgt voor een continu spectrum van 160-280nm, is
gebaseerd op elektrische excitatie
Wolfraam lamp (gloeilamp) zorgt voor zichtbaar en infrarood spectrum (350-
2200nm) en is gebaseerd op de verwarming van een filament dat gaat gloeien
bereik van golflengtes wordt bepaald door de temperatuur
Xenon lamp zorgt voor zichtbaar en ultra violet spectrum (250-600nm) en is
gebaseerd op elektrische stroom doorheen xenon dat een thermische excitatie
veroorzaakt met zeer intens licht
o Selectie golflengte
Absorptiefilter: een glas met metaaloxides absorberen ongewenste golflengte
waardoor een deel van de lichtintensitiet verlopen gaat (goedkoop)
Prisma/monochromator: werkt op basis van lichtbreking en scheidt de verschillende
frequenties van polychromatisch licht zodat een bepaalde golflente kan worden
gekozen en gebruikt
Reflectierooster/grating: monochromator op basis van interferentie en het feit dat
licht verschillende afstanden aflegt bij reflectie in verschillende invalshoeken
Sleufopening nodig bij het gebruik van een monochromator en de
stalenhouders/cuvetten moeten transparant zijn en een vaste geometrie
hebben
Lichtdetectie: conversie van fotonen naar stabiel elektrisch signaal
o Fotobuis: elektronen worden vrijgegeven door absorptie van een foton door lichtgevoelig
materiaal dat dient als kathode, het spanningsverschil zorgt dat elektronen worden
aangetrokken door de anode en er wordt een puls gegenereerd
Voordeel het gevoelig signaal word versterkt, nadeel er is een achtergrondsignaal
door de thermische elektronen
o PMT/ Photo-multiplier-tube (uitbreiding van fotobuis): het foton botst op een geladen
metaalplaat waardoor er elektronen los komen, elk dynode is minder negatief dan de vorige
en trekt dus de elektronen aan. Elk invallend elektron maakt andere elektronen los, gebruik
van meerdere dynodes versterkt het signaal
Voordeel het is zeer gevoelig voor lage lichtintensiteit en geeft snelle respons,
nadeel het vereist hoogspanning en intens licht kan schade veroorzaken
o Opstelling: single beam vs dual beam
Single beam: goedkoop maar de gevoeligheid van toestel kan gaan variëren hierdoor
kan je voor eenzelfde staal verschillende waardes krijgen
Dual beam: meet gelijktijdig een blanco zodat het meetresultaat continu
gecorrigeerd word op drift en ruis, dit is duurder
Wat kan je meten met spectrofotometrie
o (niet) geconjugeerde systemen: hoe meer geconjugeerd een systeem, hoe minder energie er
nodig is om elektronen van orbitaal te wisselen en dus hoe hoger de geabsorbeerde
golflengte
o Identificatie van specifieke stoffen: bepaalde aromatische basen of aminozuren absorberen
specifieke golflengtes
Voordelen van het kopen van samenvattingen bij Stuvia op een rij:
Verzekerd van kwaliteit door reviews
Stuvia-klanten hebben meer dan 700.000 samenvattingen beoordeeld. Zo weet je zeker dat je de beste documenten koopt!
Snel en makkelijk kopen
Je betaalt supersnel en eenmalig met iDeal, creditcard of Stuvia-tegoed voor de samenvatting. Zonder lidmaatschap.
Focus op de essentie
Samenvattingen worden geschreven voor en door anderen. Daarom zijn de samenvattingen altijd betrouwbaar en actueel. Zo kom je snel tot de kern!
Veelgestelde vragen
Wat krijg ik als ik dit document koop?
Je krijgt een PDF, die direct beschikbaar is na je aankoop. Het gekochte document is altijd, overal en oneindig toegankelijk via je profiel.
Tevredenheidsgarantie: hoe werkt dat?
Onze tevredenheidsgarantie zorgt ervoor dat je altijd een studiedocument vindt dat goed bij je past. Je vult een formulier in en onze klantenservice regelt de rest.
Van wie koop ik deze samenvatting?
Stuvia is een marktplaats, je koop dit document dus niet van ons, maar van verkoper elienbloemen. Stuvia faciliteert de betaling aan de verkoper.
Zit ik meteen vast aan een abonnement?
Nee, je koopt alleen deze samenvatting voor €5,99. Je zit daarna nergens aan vast.