Samenvatting van het vak Genoom (BMW21614) van Biomedische Wetenschappen. Bevat de volgende onderwerpen: PCR, restrictie-enzymen, DNA-gelelectroforese, genomische banken en cDNA banken, overexpressie, fusie-eiwitten, reporter-genen, Sanger sequencing, Next Generation Sequencing, DNA-klonering, plaa...
DNA-technieken
Onderzoek
o PCR
o Restrictie-enzymen
o DNA-gelelectroforese
o Genomische banken en cDNA banken
o Overexpressie
o Fusie-eiwitten
o Reporter-genen
o Sanger sequencing
o Next Generation Sequencing
Manipulatie
o Restrictie-enzymen
o DNA-klonering
o Plaatsgerichte mutagenese
o Overexpressie
o RNA-interferentie (shRNA’s)
o CRISPR/Cas9 gene editing
Manipulatie/onderzoekstechnieken
RNA-interferentie
Plasmides, kloneren, kloneringsvectoren, expressievectoren, cDNA-banken, genomische banken
Fusie-eiwitten
Reporter-genen (GFP)
Inductie van bèta-galactosidase, spectrofotometer
SDS-PAGE en Western Blot
GST-pull down
Co-IP
ChIP
CRISPR/Cas9 gene editing
(In-situ) hybridisatie
Doel: lokalisatie RNA of DNA
Methode:
o Inbrengen korte stukjes fluorescerend DNA of RNA
o DNA: uitsmelten
o Hybridisatie op specifieke sequentie
PCR
Doel: DNA selecteren en vermeerderen voor onderzoek
Methode: thermocycling
o Denaturatie: dubbelstrengs enkelstrengs
o Annealing: baseparing primers
, o Elongation: enkelstrengs dubbelstrengs
Benodigdheden:
o DNA-fragment dat je wil vermeerderen
o Forward en reverse primer (die aan 3’ kant van fragment binden op beide strengen)
o DNA-polymerase
o dNTP’s
o Buffer
o Water
Voorwaarden primers:
o Complementair aan beide kanten gen
o Niet complementair aan elkaar
o Geen interne baseparing
o 15-30 baseparen lang
o Zo veel mogelijk uit G en C
RT-PCR
Doel: RNA selecteren, vermeerderen en vergelijken
RNA te instabiel als fragment in PCR RT-PCR
Methode: maken van cDNA
o Isoleren (m)RNA
o (m)RNA RNA/DNA met reverse transcriptase en poly-T-primer (bindt poly-A-staart)
o RNA/DNA DNA/DNA met RNA degradatie en DNA-polymerase (RNA als primer)
Welke cDNA’s dit oplevert is afhankelijk van de aanwezige RNA’s in het sample zaten
Kwantitatieve RT-PCR
o Twee cDNA’s worden vermeerderd met PCR
o Toevoegen eiwit dat fluoresceert als het dubbelstrengs DNA bindt
o Hoe meer DNA hoe meer fluorescentie
o Aantal cycli nodig om maximale fluorescentie te berijken: mate voor hoeveelheid mRNA
in sample
Plaats-specifieke mutagenese
Doel: specifieke mutatie aanbrengen
Methode:
o PCR met gemuteerde primer
o Primer bindt specifieke sequentie mutatie
o Replicatie
o Verwijderen bacterieel (gemethyleerd) DNA met DNP1
Restrictie-enzymen
Herkennen palindromische sequentie in DNA
o Sticky ends: 3’ of 5’ overhang
5’ overhang kan blunt gemaakt worden
3’ overhang niet
o Blunt ends: geen overhang
Doelen:
o Inbrengen gen in expressievector
o Sequentie-onderzoek: knipt enzym wel of niet
Methode: inbrengen gen in expressievector
o Restrictie-enzymen: knip gen uit insert vector
Voordelen van het kopen van samenvattingen bij Stuvia op een rij:
Verzekerd van kwaliteit door reviews
Stuvia-klanten hebben meer dan 700.000 samenvattingen beoordeeld. Zo weet je zeker dat je de beste documenten koopt!
Snel en makkelijk kopen
Je betaalt supersnel en eenmalig met iDeal, creditcard of Stuvia-tegoed voor de samenvatting. Zonder lidmaatschap.
Focus op de essentie
Samenvattingen worden geschreven voor en door anderen. Daarom zijn de samenvattingen altijd betrouwbaar en actueel. Zo kom je snel tot de kern!
Veelgestelde vragen
Wat krijg ik als ik dit document koop?
Je krijgt een PDF, die direct beschikbaar is na je aankoop. Het gekochte document is altijd, overal en oneindig toegankelijk via je profiel.
Tevredenheidsgarantie: hoe werkt dat?
Onze tevredenheidsgarantie zorgt ervoor dat je altijd een studiedocument vindt dat goed bij je past. Je vult een formulier in en onze klantenservice regelt de rest.
Van wie koop ik deze samenvatting?
Stuvia is een marktplaats, je koop dit document dus niet van ons, maar van verkoper biomedstudent1. Stuvia faciliteert de betaling aan de verkoper.
Zit ik meteen vast aan een abonnement?
Nee, je koopt alleen deze samenvatting voor €5,49. Je zit daarna nergens aan vast.
