In deze samenvatting is de lesstof van het vak HPLC & GC beschreven. De informatie is overzichtelijk weggezet, dus alles wat bij GC hoort op een pagina en alles wat bij HPLC hoort op een pagina. Er is een pagina over monstervoorbewerking, eluenskeuze en van Deemter. De laatste pagina bevat de formu...
GC
De injectienaald is spits zodat het door de vials kan. De naald
komt eerst langs de septum (elastisch materiaal dat tegen
hoger temperaturen kan). Zowel de injector als kolom
hebben een hoge temp. Injecteren kan splitless of met split
gebeuren. Bij splitless komt de gehele injectie op de kolom
(doe dit bij lage concentraties). Bij injecteren met split komt
er maar een deel op de kolom (om fronting te voorkomen).
Wanneer de split 20:1 is, zal van 1/20 van de injectie op de
kolom komen. Om de splitflow hierbij te berekenen, doe je
de flow maal de noemer, dus bijvoorbeeld: 20 x 2 ml/min =
40 mL/min. Ook bestaat er een pyrolyse injectiesysteem
waarbij het sample volledig wordt afgebroken door een
temperatuur van 600-1000 graden (voor verf etc).
Scheiding bij de GC wordt gedaan op basis van
kookpunt. In de kolom zit de stationaire fase
aan de wand (capillair). Meestal is deze polair en
de mobiele fase apolair, maar bij de reversed
phase is dit andersom. De dikte van de
stationaire fase wordt ook wel film dikte
genoemd. Hoe dikker deze is, hoe langer de
retentie tijd.
Soort kolom Polariteit.
HP1 Is het meest apolair
HP5 Is redelijk apolair
De analyse wordt bij een bepaalde temperatuur DB-WAX Polaire kolom
gedaan. Dit kan isocratisch (temperatuur blijft
hetzelfde) of met een gradiënt (temperatuur stijgt zoals jij het hebt ingevoerd). Door een gradiënt te
gebruiken kan je de analysetijd inkorten, aangezien stoffen met een hoger kookpunt sneller uit de
kolom komen, aangezien ze zich dan in de gasfase bevinden. Het draaggas is vaak waterstof, stikstof
of helium (op basis van splitration is dit meer of minder).
Detectoren eigenschappen
FID (Flame Molecuul komt aan de onderkant van detector binnen. Waterstofgas
Ionisatie Detector) wordt binnengebracht via zijkant er ontstaat een vlam. Door vlam
wordt component geïoniseerd (moet C in component zitten). Ion wordt
stroom. (per soort stof andere detector)
MS detector 1e stap is ionisatie door beschieting met elektronen. Hierdoor worden
stukken van molecuul weggeslagen zodat je verschillende massa’s per
molecuul krijgt. Je krijgt een chromatogram en massa spectrum.
MS kan zeer lage concentraties meten in vergelijking met FID en het heeft gelijkwaardige
fragmentatiepatronen over de hele wereld.
, HPLC
Voor vloeibare stoffen die niet vluchtig
zijn.
Werking HPLC injector: Bij het vullen in
de load-stand is er een directe
verbinding tussen de pomp en kolom,
er zal dus geen monster door de kolom
lopen. Ook is er op dat moment een
verbinding tussen de monsterpoort en
afvalpoort via de loop. Deze loop heeft
een gekozen volume zodat de
hoeveelheid monster precies bepaald kan worden, aangezien het monster na injectie in de loop
blijft. Daarna wordt de injector op inject-stand gezet
en zal er een verbinding ontstaan tussen de pomp,
kolom en loop, zodat het monster in de kolom komt.
Kolom
Bij de HPLC vindt er scheiding plaats op basis van Kolom Eigenschappen
polariteit (log P) en aanwezigheid van pKa. Ook is C18 Rond deeltje waar een silica groep aan
de structuurformule belangrijk, aangezien grote zit. (zeer apolair)
moleculen er moeilijker uitkomen. Wanneer de Ion Retentie op basis van lading (m.f. heeft
pKa en pH gelijk zijn, zijn de helft van de deeltjes exchange tegenovergestelde lading en spoelt
geladen en dit wil je niet. Daarom moet er een kolom dus door.
buffer worden toegevoegd met een bepaalde pH.
Als de pKa > 7, moet er een buffer van 2 hoger worden toegevoegd (pH = 9). Is de pKa < 7, dan moet
er een buffer met een pH van 2 lager dan de pKa worden toegevoegd (pKa=5, pH = 3). De kolom kan
maar een pH tussen 3 en 8 aan, dus hier moet je mee oppassen.
Detector
Detector eigenschap
UV (VWD) Meet UV-VIS licht (van 190 nm tot 900 nm) Detecteert stoffen in dit golflengtegebied. Één
golflengte tegelijk. (kwartsglas gebruikt)
DAD Meet UV-VIS licht (van 190 nm tot 900 nm) Detecteert stoffen in dit golflengtegebied. Kan
meerde golflengtes of een heel spectrum tegelijk meten.
FLD Zendt een bepaalde golflengte uit en ontvangt een andere (komt door absorptie) Van 200
tot 600 nm. Geconjugeerde stoffen fluoresceren (wisselen tussen enkel en dubbele
bindingen).
ELSD Kan alles meten. Vloeistof wordt een spray. Deze kleine druppeltjes mobiele fase worden
verdampt. Het overgebleven molecuul gaat door een lichtstraal. Vervuiling wordt mee
gemeten. Molecuul moet hoger kookpunt hebben dan m.f.
MS 1e stap is ionisatie van molecuul. 2e stap is scheiding op basis van lading. Afhankelijk van
instellingen apparaat, er is dus geen databank.
Voordelen van het kopen van samenvattingen bij Stuvia op een rij:
Verzekerd van kwaliteit door reviews
Stuvia-klanten hebben meer dan 700.000 samenvattingen beoordeeld. Zo weet je zeker dat je de beste documenten koopt!
Snel en makkelijk kopen
Je betaalt supersnel en eenmalig met iDeal, creditcard of Stuvia-tegoed voor de samenvatting. Zonder lidmaatschap.
Focus op de essentie
Samenvattingen worden geschreven voor en door anderen. Daarom zijn de samenvattingen altijd betrouwbaar en actueel. Zo kom je snel tot de kern!
Veelgestelde vragen
Wat krijg ik als ik dit document koop?
Je krijgt een PDF, die direct beschikbaar is na je aankoop. Het gekochte document is altijd, overal en oneindig toegankelijk via je profiel.
Tevredenheidsgarantie: hoe werkt dat?
Onze tevredenheidsgarantie zorgt ervoor dat je altijd een studiedocument vindt dat goed bij je past. Je vult een formulier in en onze klantenservice regelt de rest.
Van wie koop ik deze samenvatting?
Stuvia is een marktplaats, je koop dit document dus niet van ons, maar van verkoper isisknoop. Stuvia faciliteert de betaling aan de verkoper.
Zit ik meteen vast aan een abonnement?
Nee, je koopt alleen deze samenvatting voor €6,17. Je zit daarna nergens aan vast.
