100% tevredenheidsgarantie Direct beschikbaar na je betaling Lees online óf als PDF Geen vaste maandelijkse kosten
logo-home
Eerder door jou gezocht
Eerder door jou gezocht
logo
Samenvatting - Methoden In Het Biomedisch Onderzoek 1: Hoofdstuk 13 €3,99
In winkelwagen
Snel navigeren naar
Voorbeeld
  2.  
  3. Katholieke Universiteit Leuven (KU Leuven)
  4.  
  5. Biomedische Wetenschappen
  6.  
  7. Methoden In Het Biomedisch Onderzoek 1

Samenvatting

Samenvatting - Methoden In Het Biomedisch Onderzoek 1: Hoofdstuk 13
 0 keer verkocht
  • Vak
  • Methoden In Het Biomedisch Onderzoek 1
  • Instelling
  • Katholieke Universiteit Leuven (KU Leuven)

Dit is een samenvatting van hoofdstuk 13 uit het vak methoden in het biomedisch onderzoek 1 - analyse va het DNA. Gebaseerd op de lessen en slides, bevat figuren uit de powerpoint.

Voorbeeld 3 van de 28  pagina's

Document informatie

  • 6 augustus 2023
  • 28
  • 2022/2023
  • Samenvatting

Onderwerpen

  • methoden
  • dna
  • analyse van dna
  • kloneren

Geschreven voor

  • Katholieke Universiteit Leuven (KU Leuven)
  • Biomedische Wetenschappen
  • Methoden In Het Biomedisch Onderzoek 1
Alle documenten voor dit vak (40)

Verkoper

avatar-seller
laurebrants

Ontvangen beoordelingen

Voorbeeld van de inhoud

Hoofdstuk 13: analyse van DNA
1. DNA inleiding




2. DNA extraheren
Algemeen principe
1. Lysis = afbreken van cellen zodat het DNA vrijkomt
→ lysaat = vloeistof met inhoud van gelyseerde cellen
2. Isoleren = DNA uit het lysaat halen of opzuiveren
→ RNA en eiwitten verwijderen
3. Oplossen = DNA in gewenste type en hoeveelheid vloeistof oplossen, hierbij
concentreer je het DNA ook




Lyseren
- Vaak toevoegingen:
o Remmers van niet-gewenste moleculen: RNasen, proteasen,…
o EDTA = complexeert Mg2+ waardoor die wordt afgeschermd van DNase → DNase
inactief, anders wordt DNA afgebroken

- Lysis mbv detergent
o Meest gebruikte methode → snel, reproduceerbaar, geen specifieke apparatuur
o Bij celculturen toegepast
o Hydrofiele kop en hydrofobe kop
 Verdund voorkomen: monomeer
 Hoge concentratie in oplossing: micelle met hydrofiele koppen naar
buiten en hydrofobe staarten naar elkaar gericht

, o Milde detergent (CHAPS, triton, ...)
= behoud van celorganellen mogelijk + tragere lysis
o Harde detergent (SDS, …)
= ook organellen worden opengebroken + proteïnedenaturatie
o Principe van detergent
 Lipiden monomeren nestelen zich in het lipiden dubbelmembraan
 Buitenste membraan wordt langer als binnenste → membraan krijgt licht
kromming
 Op een bepaald moment: te harde buiging en membraan knapt open →
gaten in membraan
 Langs opening gaten worden er eerst halve micellen en uiteindelijk hele
micellen gevormd




- Mechanische methoden voor lysis
o Voor DNA is dit vaak te bruut, daarom dat men meestal detergenten prefereert




o Sonicator: hoge frequentiegolven maken ook het DNA kapot → vermijden als je
DNA wilt analyseren

- DNA uit bloed lyseren
o Anticoagulans = anti-bloedstolling → EDTA, want heparine inhibeert DNA reacties
o NH4Cl → lyseert cellen zonder kern (bv RBC → heemgroepen kunnen verdere
analyse inhiberen)
o Men wilt de WBC → met kern en dus DNA
→ verder gaan zoals bij de cellen

- DNA uit weefsels lyseren
o In kleine stukjes disseceren
o Met vloeibare stikstof → in mortier met pestel pletten tot een
poeder

, → verder gaan zoals bij cellen

- DNA uit cellen lyseren: met buffer
o SDS = detergent → afbreken membraan + eiwitten
o Enzymes: eiwitten en RNA afbreken
o EDTA: complexeert Mg → inhibitie DNase

DNA isoleren
- Organische solventen
o Scheiding DNA, RNA en eiwitten op basis van verschillende oplosbaarheid in
verschillende niet-mengbare vloeistoffen
o Voeg phenol-chloroform-isoamyl extractie toe + vortex (mengen)
 Phenol → denatureert eiwitten + minder polair dan water waardoor DNA
hier niet zal in oplossen
 Chloroform → verhoogt efficiëntie van eiwit denaturatie + denatureert
lipiden
 Isoamyl → vermindert schuimvorming
o Centrifugeer
 Pellet = organische fase met lipiden + interfase met proteïnen
 Supernatans = waterige fase met DNA
o Breng waterige fase over in nieuwe eppendorf

→ nadeel van deze manier: restanten van organische solventen in DNA + stoffen zijn
corrosief en toxisch

- Geconcentreerd zout
o Principe
 Voeg NaCl toe en centrifugeer → onttrekt sneller water van rond de
eiwitten dan rond DNA → eiwitten slaan neer en vormen pellet
 Supernatans bevat DNA → overbrengen naar nieuwe eppendorf
o Voordeel: eenvoudig, goedkoop en goede opbrengst & zuiverheid
o Na salting out & na phenol-chloroform extractie → ethanol precipitatie
(neerslaan van DNA) voor verdere opzuivering en concentratie van DNA (zie
verder)

- Kolomchromatografie
o Principe
 Bepaalde condities van zout en pH zorgen ervoor dat DNA aan matrix van
kolom bindt
 Andere condities zorgen voor elutie = vrijzetten van DNA
o Drijvende krachten van beweging doorheen kolom
 Centrifugatie
 Zwaartekracht
 Vacuüm

o Verschillende types
 Silica kolom

Dit zijn jouw voordelen als je samenvattingen koopt bij Stuvia:

Bewezen kwaliteit door reviews

Bewezen kwaliteit door reviews

Studenten hebben al meer dan 850.000 samenvattingen beoordeeld. Zo weet jij zeker dat je de beste keuze maakt!

In een paar klikken geregeld

In een paar klikken geregeld

Geen gedoe — betaal gewoon eenmalig met iDeal, creditcard of je Stuvia-tegoed en je bent klaar. Geen abonnement nodig.

Direct to-the-point

Direct to-the-point

Studenten maken samenvattingen voor studenten. Dat betekent: actuele inhoud waar jij écht wat aan hebt. Geen overbodige details!

Veelgestelde vragen

Wat krijg ik als ik dit document koop?

Je krijgt een PDF, die direct beschikbaar is na je aankoop. Het gekochte document is altijd, overal en oneindig toegankelijk via je profiel.

Tevredenheidsgarantie: hoe werkt dat?

Onze tevredenheidsgarantie zorgt ervoor dat je altijd een studiedocument vindt dat goed bij je past. Je vult een formulier in en onze klantenservice regelt de rest.

Van wie koop ik deze samenvatting?

Stuvia is een marktplaats, je koop dit document dus niet van ons, maar van verkoper laurebrants. Stuvia faciliteert de betaling aan de verkoper.

Zit ik meteen vast aan een abonnement?

Nee, je koopt alleen deze samenvatting voor €3,99. Je zit daarna nergens aan vast.

Is Stuvia te vertrouwen?

4,6 sterren op Google & Trustpilot (+1000 reviews)

Afgelopen 30 dagen zijn er 69052 samenvattingen verkocht

Opgericht in 2010, al 15 jaar dé plek om samenvattingen te kopen

Begin nu gratis
€3,99
  • (0)
In winkelwagen
Toegevoegd