Samenvatting
Samenvatting tentamen MBT
- Vak
- MBT (B05MBT)
- Instelling
- Hogeschool Leiden (HSL)
Alle leerdoelen en belangrijke punten uitgewerkt voor het tentamen van MBT. Voor het tentamen is een 9,4 behaald.
[Meer zien]Voorbeeld 2 van de 15 pagina's
Voorbeeld 2 van de 15 pagina's
In winkelwagengesponsord bericht van onze partner
Voorbeeld van de inhoud
Samenvatting MBTIsolatie DNA en RNA
Als je DNA/RNA wilt isoleren, moet je altijd schoon werken DNAse en RNAse vrij. Ook werk je
altijd op ijs.
DNA -isolatie voor sequencing, RNA-isolatie voor genexpressie en eiwitisolatie voor functie/plek
eiwit.
Homogenisatie: cellen los van elkaar maken.
Lyse: het kapot maken van cellen.
Stap 1: Het kapot maken van het biologische materiaal
- Sonificatie (niet vaak gebruikt)
- Osmotisch zoutconcentratie verhogen/verlagen
- Enzymatisch lysozym of proteinase K
- Door in te vriezen en vervolgens te ontdooien ijskristallen beschadigen het celmembraan
PBS (fosfaat gebufferde zoutoplossing) wordt gebruikt om vooraf de cellen te wassen. Hierbij
verdwijnen mediumcomponenten en mogelijk DNAse, RNAse en proteases.
Stap 2: Het toevoegen van een zoutoplossing voor verdere scheiding
Stap 3: Het toevoegen van een detergentia (Triton X-100 of SDS)
- Membranen lossen op in de cel hierdoor gaten in de membranen
- Eiwitten ontvouwen
- Watermantel wordt verdreven
Stap 4: Binden aan silicagel
Door de aanwezigheid van een chaotroop kan DNA/RNA binden aan de silicagel. Als dit vervolgens bij
de elutie wordt gewassen met water/TE buffer, verdwijnt de chaotroop en laten de DNA/RNA
moleculen los van de silicagel. Er moet alcohol in de oplossing aanwezig zijn, hierdoor slaat een deel
neer en bindt DNA/RNA beter. Bij isolatie van DNA wordt er RNAse toegevoegd en bij isolatie van
RNA wordt er DNAse toegevoegd.
DNAse onschadelijk maken:
- Temperatuur verlagen, zo wordt de werking verminderd.
- EDTA of EGTA toevoegen, deze vangen Magnesium en Calcium ionen (cofactoren van DNAse)
weg. EGTA is selectiever voor Calcium ionen
- DNAse wordt gedenatureerd door middel van autoclavering (pipetpuntjes, glaswerk etc.)
RNAse onschadelijk maken:
Geen cofactor nodig en na autoclavering kunnen ze weer in de originele vorm terug vouwen.
RNAse vernietigd in kleine hoeveelheid al snel RNA. Als bescherming tegen infecties door virussen
met een RNA-genoom scheidt het lichaam grote hoeveelheden RNAse uit. RNA moet altijd in de
vriezer bewaard worden.
- Tijd laten staan in DEPC, dit inactiveert enzymen door het te modificeren. De oplossing kan
DEPC vrij worden gemaakt door autoclavering.
, Eiwitten kunnen worden afgebroken door proteases. De groep met Zink als cofactor kan worden
geremd met protease-inhibitors.
PCR
De reden om een PCR uit te voeren kan zijn: klonering (hele gen amplificeren), detectie (deel van gen
amplificeren).
Termen DNA replicatie (in de cel):
Origin of replication: het startpunt van de DNA replicatie
Topoisomerase: ontvouwt de DNA-strengen
Helicase: opent het DNA bij de replicatievork
Single-strand binding proteins: zorgt dat de open DNA keten niet opnieuw een dubbele helix kan
vormen.
Primase: synthetiseert RNA primers complementair aan de DNA streng
DNA-polymerase: synthetiseert DNA van 5’ naar 3’ leest af van 3’ naar 5’.
Door een ander soort DNA-polymerase worden de RNA primers vervangen door DNA
DNA ligase: ligeert de DNA-fragmenten
Stappen PCR:
Denaturatie: waterstofbruggen worden verbroken, hierdoor wordt DNA enkelstrengs.
Annaeling: DNA-primers kunnen aan de complementaire sequentie in de strengen hechten.
Extensie: losse nucleotiden worden door Taq-DNA-polymerase aan de DNA strengen toegevoegd,
zodat DNA weer dubbelstrengs wordt.
Temperatuur en duur fases:
Benodigdheden voor PCR:
DNA monster, primers, nucleotiden (dNTP’s), Taq-polymerase, buffer mix en PCR epje.
Het epje is dunwandig, zodat de temperaturen in het epje snel kunnen veranderen.
In de buffer zit vaak Magnesium, dit is een cofactor voor DNA-polymerase, het stabiliseert ook de
DNA-helixen. Hiervan moet niet teveel toegevoegd worden, anders worden er verkeerde nucleotiden
ingebouwd door de stabiliteit. De buffer bevat ook KCl (optimale binding primers) en Tris (optimale
pH voor enzym).
Voordelen van het kopen van samenvattingen bij Stuvia op een rij:
Verzekerd van kwaliteit door reviews
Stuvia-klanten hebben meer dan 700.000 samenvattingen beoordeeld. Zo weet je zeker dat je de beste documenten koopt!
Snel en makkelijk kopen
Je betaalt supersnel en eenmalig met iDeal, creditcard of Stuvia-tegoed voor de samenvatting. Zonder lidmaatschap.
Focus op de essentie
Samenvattingen worden geschreven voor en door anderen. Daarom zijn de samenvattingen altijd betrouwbaar en actueel. Zo kom je snel tot de kern!
Veelgestelde vragen
Wat krijg ik als ik dit document koop?
Je krijgt een PDF, die direct beschikbaar is na je aankoop. Het gekochte document is altijd, overal en oneindig toegankelijk via je profiel.
Tevredenheidsgarantie: hoe werkt dat?
Onze tevredenheidsgarantie zorgt ervoor dat je altijd een studiedocument vindt dat goed bij je past. Je vult een formulier in en onze klantenservice regelt de rest.
Van wie koop ik deze samenvatting?
Stuvia is een marktplaats, je koop dit document dus niet van ons, maar van verkoper isabeldevette. Stuvia faciliteert de betaling aan de verkoper.
Zit ik meteen vast aan een abonnement?
Nee, je koopt alleen deze samenvatting voor €6,49. Je zit daarna nergens aan vast.
Is Stuvia te vertrouwen?
4,6 sterren op Google & Trustpilot (+1000 reviews)
Afgelopen 30 dagen zijn er 52355 samenvattingen verkocht
Opgericht in 2010, al 14 jaar dé plek om samenvattingen te kopen