College aantekeningen
Onderzoeksmethoden Thema 3 Flowcymetrie
- Instelling
- Universiteit Utrecht (UU)
Hoorcollege over flowcymetrie en het protocol is uitgebreid en overzichtelijk uitgewerkt in dit document.
[Meer zien]Voorbeeld 2 van de 7 pagina's
Voorbeeld 2 van de 7 pagina's
In winkelwagengesponsord bericht van onze partner
Voorbeeld van de inhoud
FLOWCYMETRIEHOORCOLLEGE FLOWCYMETRIE
Betekenis flowcymetrie
• Flow: cellen in beweging
• Cyto: cellen
• Metry: meten
• Een technologie die gelijktijdig meerdere fysieke kenmerken van afzonderlijke deeltjes,
gewoonlijk cellen, meet en analyseert terwijl zij in een vloeistofstroom door een lichtbundel
stromen.
• De metingen worden per cel verricht op een routinesnelheid van 500 tot 4000 cellen per seconde
• FACS: Fluorescence Activated Cell Sorting. Je meet dan niet alleen, maar je gaat ze ook sorteren.
Wat kunnen we analyseren met FC?
• Meercellige organisme
• Eukaryotische cellen
• Cellulaire organellen
• Bacteriën
• Liposomen
• Virussen
• Enkele moleculen
Wat kan FC ons vertellen over een cel?
• Relatieve grootte (Forward Scatter – FSC)
o Verstrooit licht
o Gerelateerd aan de celoppervlak
o Wordt in de lijn met het licht gemeten: Light Scatter Diode
• Relatieve interne complexiteit (Side Scatter – SSC)
o Gereflecteerd en gebroken licht
o Heeft te maken met cel granuliteit en complexiteit
o Wordt op 90 graden van de laser gemeten
• Relatieve fluorescentie intensiteit (FL1, FL2, FL3, FL4, etc.)
Scatter Plot
• Hoe groter de cel, hoe verder naar rechts de stop op de x-as zit.
• Hoe complexer de cel, hoe hoger deze op de y-as zit.
• Voorbeeld: lymfocyten, monocyten, granulocyten.
Fluorescentie
• De verschillende fluorochromen absorberen het laserlicht
(=excitatie/absorptie) en zenden licht uit met een hogere
golflengte (= emissie)
• Kleur (emissiegolflengte) van dit licht is afhankelijk van het
gebruikte fluorochroom.
• Een fluorescente groep wordt aangeslagen met de laser, deze
komt in een hogere energie staat, vervalt en emitteert licht met
ietjes minder energie, de golflengte wordt dus hoger.
• Mate van fluorescentie geeft maat van binding weer, laag en
hoog positief voor de marker
• Strokes shift: het verschil tussen de golflengte van absorptie en emissie
, •
Werking flowcell
• De cellen uit de monsterbuis worden in de mantelstroom geïnjecteerd.
• De stroom in een stroomcel is laminair: je zit in het midden van je sample.
• Het hydrodynamische focussing (concentratie op 1 plek) duwt de cellen om 1
lijn te vormen langs hun lange as (horizontaal)
• De vorm van de flowcel verstrekt de mogelijkheid voor hydrodynamisch
focussing van de cellen.
Werking flowcytometer
• Vloeistofsysteem
o Pomp brengt sheat fluid op druk
o Sheat fluid loopt door een filter
o Sheat fluid gaat door een flowcell
o Eindigt in afval vat
o Injectienaald injecteert in flowcell
o Verdwijnt hierna ook in afval vat
→ Om de cellen in te brengen en te focussen
voor ondervraging
• Hydrodynamic focusing
o In de flowcell is het belangrijk dat de
cellen een voor een door de laserstraal
gaan
o Je hebt een continue stroming van de
sheath vloeistof, je sample wordt daar met een iets hogere druk ingevoerd
o De sheath vloeistof drukt hierdoor de sample samen, omdat deze stromen niet mengen krijg
je laminaire stroming waarin alle cellen oplijnen.
Dit zijn jouw voordelen als je samenvattingen koopt bij Stuvia:
Bewezen kwaliteit door reviews
Studenten hebben al meer dan 850.000 samenvattingen beoordeeld. Zo weet jij zeker dat je de beste keuze maakt!
In een paar klikken geregeld
Geen gedoe — betaal gewoon eenmalig met iDeal, creditcard of je Stuvia-tegoed en je bent klaar. Geen abonnement nodig.
Direct to-the-point
Studenten maken samenvattingen voor studenten. Dat betekent: actuele inhoud waar jij écht wat aan hebt. Geen overbodige details!
Veelgestelde vragen
Wat krijg ik als ik dit document koop?
Je krijgt een PDF, die direct beschikbaar is na je aankoop. Het gekochte document is altijd, overal en oneindig toegankelijk via je profiel.
Tevredenheidsgarantie: hoe werkt dat?
Onze tevredenheidsgarantie zorgt ervoor dat je altijd een studiedocument vindt dat goed bij je past. Je vult een formulier in en onze klantenservice regelt de rest.
Van wie koop ik deze samenvatting?
Stuvia is een marktplaats, je koop dit document dus niet van ons, maar van verkoper fleurheling. Stuvia faciliteert de betaling aan de verkoper.
Zit ik meteen vast aan een abonnement?
Nee, je koopt alleen deze samenvatting voor €4,49. Je zit daarna nergens aan vast.
Is Stuvia te vertrouwen?
4,6 sterren op Google & Trustpilot (+1000 reviews)
Afgelopen 30 dagen zijn er 69052 samenvattingen verkocht
Opgericht in 2010, al 15 jaar dé plek om samenvattingen te kopen