Tentamen (uitwerkingen)
Gentechnologie I: Uitgewerkte examenvragen
- Vak
- Instelling
Voorgaande & veelvoorkomende vragen, volledig uitgewerkt aan de hand van cursus & slides
[Meer zien]Voorbeeld 4 van de 37 pagina's
Voorbeeld 4 van de 37 pagina's
In winkelwagen
In winkelwagen
gesponsord bericht van onze partner
Verkoper
Volgen
NVbiochem
Voorbeeld van de inhoud
Gentechnologie I2e bachelor Biochemie-Biotechnologie
Uitgewerkte vragen (theorie + wc)
, De Veylder
Open vragen
Bespreek zinkvinger endonuclease
Deze nucleasen zijn hybride moleculen opgebouwd uit een polymeer zink vinger domein
specifiek voor een welbepaalde DNA herkenningssequentie, gekoppeld aan een FokI
endonuclease domein.
FokI restrictie-enzym functioneert als een dimeer eiwit
→ 2 heterodimere zink vinger nucleasen worden aangemaakt voor de volledige verknipping
van dsDNA
→ herkenning door aanwezigheid van zink vinger structuren (zie figuur)
→ DNA herkenning van beide hybride nucleasen
→ FokI domein van beide hybride resulteert in dimerisatie van FokI
→ verknipping van het DNA
Bespreek gradiëntszuivering
,Gelelektroforese + uitleggen welke techniek je bij een fragment van 50 tot 200 kb zou
gebruiken
Bij 50-200kb → Pulsed Field Gelelektroforese
→ Fragmenten boven 50 kb kunnen niet door poriën dus lopen langs de gel (als reptiel)
Bij elke verandering in stroomshock moeten de fragmenten zich wenden
- Grote fragmenten → moeilijker wendbaar
(2x) Bespreek 2 mogelijkheden om willekeurige mutaties aan te brengen en om
plaatsspecifieke mutaties aan te brengen.
Willekeurige mutagenese kan via
- Mutatorstam
- Straling
- Chemische mutagenese
De 2 mogelijkheden voor plaatsspecifieke mutaties zijn de volgende:
1. Als er een unieke knipplaats is in het gekloneerd DNA ter hoogte van de plaats waar een
mutatie bestudeerd moet worden, kan hier geknipt worden.
→ Bij toevoeging exonuclease → deletie
→ Er kan ook een synthetisch oligo worden toegevoegd in plaats van een exonuclease →
frameshift
Het probleem hier is dat er een unieke restrictieplaats moet aanwezig zijn
2. Toevoegen oligonucleotide-primer → plaatsspecifieke mutagenese → primer zal met
het DNA annealen, dat enkelstrengig werd gemaakt na denaturatie door hittebehandeling.
, → Dit kan ook zonder perfecte complementariteit in de juiste condities
Na de aanhechting van de mutagenese-primer & 1e replicatie-ronde → parentale
plasmidestreng draagt methylatie.
Deze streng kan geknipt worden door methylatie-specifieke restrictie-enzymen (Dpn1),
terwijl de ongemethyleerde strengen ongedeerd blijven en zullen vermenigvuldigen, dan
→ inverse PCR: primers gaan van elkaar wegkijken ipv naar elkaar toe.
Waar de ene primer dan stopt gaat de andere starten zodat de hele vector kan worden
geamplificeerd.
Als er dan een mutatie in één van de 2 primers aanwezig is, wordt een specifieke mutatie
geïntroduceerd.
Ligatie van de vector: werkt alleen bij aanwezigheid van
→ ATP
→ 5’ fosfaat
De gemethyleerde parentale streng kan verwijderd worden door behandeling met Dpn1.
De willekeurige mutaties kunnen als volgt worden geïntroduceerd:
1. Gebruik van mutatorstam
= stam waarin willekeurige mutagenese kan worden bekomen bij het binnenbrengen van
een gen.
→ Zo een stam kan deficiënt zijn in stappen van de DNA repair machinerie (mutS, mutD,
mutT) → zorgt voor hogere mutatiefrequentie dan in WT stammen
De vector wordt in de mutatorstam gebracht.
Tijdens replicatie van de vector gaan er veel fouten worden ingebouwd. Het genetisch
materiaal wordt geïsoleerd en gesequeneerd.
→ eenvoudig & goedkoop om een groot aantal random puntmutaties in te brengen in een
gen van interesse
→ Nadeel: kolonies groeien traag, de aspecifieke mutaties kunnen ook plaatsvinden in een
gen dat we helemaal niet willen onderzoeken
Voordelen van het kopen van samenvattingen bij Stuvia op een rij:
Verzekerd van kwaliteit door reviews
Stuvia-klanten hebben meer dan 700.000 samenvattingen beoordeeld. Zo weet je zeker dat je de beste documenten koopt!
Snel en makkelijk kopen
Je betaalt supersnel en eenmalig met iDeal, creditcard of Stuvia-tegoed voor de samenvatting. Zonder lidmaatschap.
Focus op de essentie
Samenvattingen worden geschreven voor en door anderen. Daarom zijn de samenvattingen altijd betrouwbaar en actueel. Zo kom je snel tot de kern!
Veelgestelde vragen
Wat krijg ik als ik dit document koop?
Je krijgt een PDF, die direct beschikbaar is na je aankoop. Het gekochte document is altijd, overal en oneindig toegankelijk via je profiel.
Tevredenheidsgarantie: hoe werkt dat?
Onze tevredenheidsgarantie zorgt ervoor dat je altijd een studiedocument vindt dat goed bij je past. Je vult een formulier in en onze klantenservice regelt de rest.
Van wie koop ik deze samenvatting?
Stuvia is een marktplaats, je koop dit document dus niet van ons, maar van verkoper NVbiochem. Stuvia faciliteert de betaling aan de verkoper.
Zit ik meteen vast aan een abonnement?
Nee, je koopt alleen deze samenvatting voor €8,49. Je zit daarna nergens aan vast.
Is Stuvia te vertrouwen?
4,6 sterren op Google & Trustpilot (+1000 reviews)
Afgelopen 30 dagen zijn er 75632 samenvattingen verkocht
Opgericht in 2010, al 14 jaar dé plek om samenvattingen te kopen