,Hoofdstuk 1
Werking van het lac operon
Het lac operon bevat 3 genen (3 cistronen)
- z-gen: β-galacotsidase (lactose splitsen)
- y-gen: permease (lactose opnemen)
- a-gen: transacetylase (niet nodig voor lactosefermentatie)
Ingewikkelde regulatie:
- Wel glucose, geen lactose 🡪 geen lacRNA synthese
- Geen glucose, wel lactose 🡪 actieve RNA synthese
- Wel glucose, wel lactose 🡪 Cel prefereert glucose, sterk verlaagde expressie
Hoofdstuk 2
Hoe worden ongewone nucleotiden ingebouwd?
1. Artificiële incorporatie van een base-analoog
vb. 5-bromouracil kan thymidine vervangen in DNA
vb. Uracil kan in DNA ingebouwd worden uit dUTP in competitie met dTTP
2. Incorporatie van enzymatisch gewijzigde moleculen
Vb. hydroxymethylcytosine bij T-evenfagen
Faaginfecties met T-evenfagen:
dCTP volledig vervangen door HMC (5-hydroxymethyl-dCTP)
Om alle cytosine in het faaggenoom te vervangen door HMC 🡪 dCTP in waardecel mag niet meer
gesynthetiseerd worden. Daarom synthetiseert de faag nieuwe enzymen:
- dCDPase-dCTPase
elimineert dCDP en dCTP 🡪 dCMP (substraat voor hydroxylmethylase)
- Hydroxymethylase
converteert dCMP 🡪 hydroxymethyl-dCMP
- Nucleoside monofosfaat kinase
fosforyleert hydroxymethyl-dCMP 🡪 hydroxymethyl-dCDP
- Glycosyltransferasen
Glycolyseert hydroxymethyl-dCTP
- dCMP deaminase
elimineert dCMP
genereert dUMP
- Nucleasen (vb. endo II en endo IV)
Zullen waardecel-DNA afbreken (zijn specifiek voor cytosine-bevattend DNA)
Metabolieten die vrijkomen 🡪 gebruikt voor DNA synthese vh virus
3. Modificatie van het DNA
Vb. Aanwezigheid 6-methyladenine & 5-methylcytosine in bacteriële DNA’s
Vb. Aanwezigheid 5-methylcytosine in eukaryoten
🡺 Kom door de werking van methyltransferasen op vooraf gesynthetiseerde DNAstrengen
2
,Wat is de functie van gemodificeerde nucleotiden bij fagen?
Bescherming tegen eigen nucleasen:
- HO-Me-C tegen bacteriofaag T nucleasen,
- Glc-Me-C tegen restrictie-enzymen,
- HO-Me-U bij B.subtilis tegen restrictie
Signalen voor transcriptie
HO-Me-U en Glc-HO-Me-C geven signalen voor transcriptie, van o.a late functies bij faagreplicatie
Invloed op ‘packaging’ van faag DNA
Assemblage van faag partikel
Wat is de functie van basemodificaties bij bacteriën?
Restrictie-modificatiesysteem
Bescherming tegen eigen restrictie-enzymen door methylatie van het DNA
(Restrictie enzymen = endonucleasen die beschermen tegen vreemd DNA van vb. fagen, plasmiden)
Dit systeem kan gebeuren door
- Dam (DNA adenine methylase)
🡪 zal de A in de sequentie GATC methyleren
- Dcm (DNA cytosine methylase)
🡪 Zal de C in sequentie CCAGG of CCTGG methyleren
- Specifieke methylasen
🡪 Zal bv. Enkel EcoRI restrictiesites methyleren
Bacteriofaag exclusiesysteem (BREX)
Geeft amper bescherming voor vreemde plasmiden
Bestaat uit 6 genen in het genoom die uit 2 operons bestaat
6 genen bevatten
- Methyltransferase
🡪 Methyleert een tweede A in de sequentie 5’-TAGGAG-3’
- Fosfatase
- RNA-bindend eiwit
- Protease
- Onbekende eiwitten
Deze methylatie beschermt tegen faagreplicatie
🡺 Door het blokkeren van lytische en lysogene faagcycli
3
, Belang bij initiatie van een nieuwe replicatieronde
Methylatietoestand van de ori zal bepalen of er replicatie zal plaatsvinden
DNA herstel
Nieuw gesynthetiseeerde streng is nog niet gemethyleerd
🡺 Herstelmechanisme an weten welke DNA streng hersteld moet worden
🡺 DNA mismatch repair
Dam methylatie thv GATC
Kan een effect hebben op transcriptie
🡺 Vb. Als GATC sequentie voorkomt in sequenties nodig voor het binden van RNA polymerase
DNA methylatie in bacteriën
Kan ook effect hebben op transpositie en conjugatie
Omschrijf de structuur van B-DNA
B-DNA komt voor onder hoge vochtigheidsgraad (>80%)
2 antiparallelle strengen, rechtsdraaiend, opgebouwd uit:
- Fosfaat: hydrofiel karakter
- Deoxyribose: goed wateroplosbaar
- Heterocyclische base: weinig wateroplosbaar
Afstand tussen fosfaatgroepen 6Å
Dikte van de vlakke kant van de base 3.3 Å
Grootte opening 2.7 Å
Opening tussen de treden kwijtraken:
Slide: Basenparen horizontaal verschuiven tov elkaar (om afstoting – ladingen te minimaliseren)
Aanwezige krachten in de helix
H-bruggen
A-T (2 H-bruggen)
G-C (3 H-bruggen)
Stapelingskrachten
= Van der Waalskrachten + hydrofobe interacties
Dimensies
Verschuiving/stap 3.3 Å
Twist 36° (10bp per omwenteling)
Diameter DNA-helix 20 Å
Pitch/spoed = lengte van 1 helicale winding 33 Å
Groeven
Groeven zijn het gevolg vd geometrie van de basenparen.
Hoek waarmee 2 suikers uitsteken:
- 120° voor kleine hoek
- 240° voor grote hoek
4
Voordelen van het kopen van samenvattingen bij Stuvia op een rij:
Verzekerd van kwaliteit door reviews
Stuvia-klanten hebben meer dan 700.000 samenvattingen beoordeeld. Zo weet je zeker dat je de beste documenten koopt!
Snel en makkelijk kopen
Je betaalt supersnel en eenmalig met iDeal, creditcard of Stuvia-tegoed voor de samenvatting. Zonder lidmaatschap.
Focus op de essentie
Samenvattingen worden geschreven voor en door anderen. Daarom zijn de samenvattingen altijd betrouwbaar en actueel. Zo kom je snel tot de kern!
Veelgestelde vragen
Wat krijg ik als ik dit document koop?
Je krijgt een PDF, die direct beschikbaar is na je aankoop. Het gekochte document is altijd, overal en oneindig toegankelijk via je profiel.
Tevredenheidsgarantie: hoe werkt dat?
Onze tevredenheidsgarantie zorgt ervoor dat je altijd een studiedocument vindt dat goed bij je past. Je vult een formulier in en onze klantenservice regelt de rest.
Van wie koop ik deze samenvatting?
Stuvia is een marktplaats, je koop dit document dus niet van ons, maar van verkoper NVbiochem. Stuvia faciliteert de betaling aan de verkoper.
Zit ik meteen vast aan een abonnement?
Nee, je koopt alleen deze samenvatting voor €10,49. Je zit daarna nergens aan vast.