Overig

Lab journal Practical 2: Diagnostic Restriction Digest of Human Hemoglobin Gene- Genetics (AB_1135)

0 keer verkocht

Vak
Genetics (AB_1135) (AB_1135)

Instelling
Vrije Universiteit Amsterdam (VU)

Lab journal of practical 2 'Diagnostic Restriction Digest of Human Hemoglobin Gene' in the course Genetics (AB_1135) at Vrije Universiteit Amsterdam

[Meer zien]

Voorbeeld 2 van de 5 pagina's

Bekijk voorbeeld

Geupload op 16 november 2023
Aantal pagina's 5
Geschreven in 2023/2024
Type Overig
Persoon Onbekend

€4,79

In winkelwagen

Op verlanglijstje

100% tevredenheidsgarantie
Direct beschikbaar na je betaling
Lees online óf als PDF
Geen vaste maandelijkse kosten

Tuesday 12th September 2023

Experiment 2: Diagnostic Restriction Digest of Human Hemoglobin Gene

Aim of the Experiment
The aim of this experiment is to investigate whether the Hemoglobin gene (HBB) is present
in a bacterial plasmid. To achieve this, the gene will be cleaved with the help of enzymes at
various positions and determined if the correct fragment sizes will appear using gel
electrophoresis.

Hypothesis
The plasmid including the HBB gene will be cleaved in 2 fragments by the BamHI enzyme.
The small fragment is expected to contain the HBB gene and have a length of 1155 base
pairs, the big fragment is expected to have a length of 9474 base pairs.

Materials and Methods
● Water
● Restriction enzymes on ice
● Enzyme buffer (cutsmart buffer)
● Heat block at 37 degrees celsius
● 6x loading dye
● Gel electrophoresis (prepared by supervisors)
● Purified plasmid, concentration approx. 150 ng / microliter

All the steps of the Protocol of experiment 1 in the Lab Manual were followed.

1. Firstly 4 µL of plasmid DNA, 2 µL of 10x cutsmart buffer, 20 µL of water were added
into one Eppendorf tube. My partner and I chose the enzyme BamHI, of which 2 µL
was added to the Eppendorf tube as well.
- The plasmid DNA, cutsmart buffer and the enzyme BamHI were pipetted with
a micropipette P20.
- The 20 µL of water was pipetted with a micropipette P200.
2. The delusion was incubated in a heat block, at 37 Celcius. This is the optimal
condition for the enzyme to exercise its function.

Due to miscommunication and time constraints, my partner and I were not able to load our
sample into the gel. We joined the group next to us, for the upcoming further steps:

This group chose BamHI, and Mfel as a second enzyme.

3. 4 µL of loading dye mix was added to the sample. This makes the sample visible and
heavier. This step was done with a micropipette P20.
4. The 20 µL sample was loaded/pipetted in one empty lane of the gel. The supervisor
added a ladder in the first lane of the gel. In this way all the known fragment lengths
would become visible.
5. The gel was run in the gel electrophoresis chamber, at 100-150V.
6. The fragment sizes of the sample were compared to the ladder.

, Results
Figure 1. The ladder used in gel electrophoresis (BMS Genetics manual page 16, 2023)

Figure 2. Obtained results gel electrophoresis

The fragment sizes that came out of the gel electrophoresis in figure 2 were interpreted
using the ladder in figure 1:
● 6000 bases and 48 ng
● 5000 bases and 40 ng

Dit zijn jouw voordelen als je samenvattingen koopt bij Stuvia:

Bewezen kwaliteit door reviews

Studenten hebben al meer dan 850.000 samenvattingen beoordeeld. Zo weet jij zeker dat je de beste keuze maakt!

In een paar klikken geregeld

Geen gedoe — betaal gewoon eenmalig met iDeal, creditcard of je Stuvia-tegoed en je bent klaar. Geen abonnement nodig.

Direct to-the-point

Studenten maken samenvattingen voor studenten. Dat betekent: actuele inhoud waar jij écht wat aan hebt. Geen overbodige details!

Veelgestelde vragen

Wat krijg ik als ik dit document koop?

Je krijgt een PDF, die direct beschikbaar is na je aankoop. Het gekochte document is altijd, overal en oneindig toegankelijk via je profiel.

Tevredenheidsgarantie: hoe werkt dat?

Onze tevredenheidsgarantie zorgt ervoor dat je altijd een studiedocument vindt dat goed bij je past. Je vult een formulier in en onze klantenservice regelt de rest.

Van wie koop ik deze samenvatting?

Stuvia is een marktplaats, je koop dit document dus niet van ons, maar van verkoper nynkeweitenberg. Stuvia faciliteert de betaling aan de verkoper.

Zit ik meteen vast aan een abonnement?

Nee, je koopt alleen deze samenvatting voor €4,79. Je zit daarna nergens aan vast.

Is Stuvia te vertrouwen?

4,6 sterren op Google & Trustpilot (+1000 reviews)

Afgelopen 30 dagen zijn er 68175 samenvattingen verkocht

Opgericht in 2010, al 15 jaar dé plek om samenvattingen te kopen

Begin nu gratis