Samenvatting
samenvatting practicum biochemie en biotechnologie
- Vak
- Instelling
alle leerstof van de powerpoints, leerpaden, cursus, practica en testen staan hierin verwerkt per hoofdstuk. De vakprof is Katrien Remaut.
[Meer zien]Voorbeeld 3 van de 24 pagina's
Voorbeeld 3 van de 24 pagina's
In winkelwagen
In winkelwagen
gesponsord bericht van onze partner
Verkoper
Volgen
jadecallebaut
Voorbeeld van de inhoud
Opzuivering en identificatie van DNA= pDNAInleiding:
- pDNA
o pDNA= cirkelvormige dubbele streng DNA
o Ligt buiten chromosomaal DNA
o Genetische info tsn bacteriën uitwisselen
o Kunnen alleen of met honderden in een cel/ bacterie zitten
o Dragen minstens 1 gen
o Kan onafhankelijk repliceren
Origin of replication
o Selectiemarker: gen dat resistentie tegen bepaald antibioticum is
- Plasmide= buiten chromosoom van eencellige organismen
o 3 belangrijke locaties
Origin of replication: replicatie start hier
Multiple cloning site (MPS): sequentie met herkenningssites voor RE
Antibiotica resistentiegen-> selectie
- Kunstmatige plasmiden
o Vaak gebruikt voor genetische modificaties uit te voeren
o Stukken DNA met gewenste eigenschappen aan cel toevoegen
o Gentherapie hiermee
o In wetenschappelijk onderzoek:
Vaak gebruikt om bepaalde structuren fluorescent te kleuren
Plasmiden met GFP (green fluorescent protein)
- Restrictie-enzymen
o Herkent specifieke DNA-sequenties → knipt DNA strengt daar doormidden
o Kunstmatig kan men een nieuw DNA stuk invoegen
o Elk restrictie-enzym → eigen specifieke nucleotidenvolgorde
o Enzym dat een specifieke DNA-sequentie herkent (recognition site) en deze doorknipt
Enzymen knippen bij verschillende plasmiden op verschillende plaatsen
Fragmenten van verschillende groottes
o M.b.v. restrictie: nieuwe genen in plasmide brengen
o 4-8 nucleotiden lang
o Je kan er plasmide mee identificeren
1 enzym knipt in verschillende plasmiden op verschillende plaatsen=> fragmenten van
verschillende groottes
=> nieuw stuk DNA kan ingevoerd w
o Hierna volgt DNA ligase: plakt het plasmide met nieuwe gen terug toe
o Bacteriën w gekweekt in een geschikt medium dat de juiste antibiotica bevat=> enkel bacteriën die
het plasmide bevatten (én het antibioticumresistentiegen) zijn in staat om te groeien
1
, Hierna w bacteriën gelyseerd om de plasmiden te isoleren, nu komt de zuivering
- Vermeerderen van pDNA in bacteriën
o Gewenst plasmide verkregen → opkweken in bacteriën
o Antibiotica rijk medium → enkel plasmiden overleven met
antibioticumresistentie
o Na groeiperiode → gelyseerd om plasmiden te isoleren
2
, DNA opzuivering
1.a Lyse van bacteriën 2. Binden van DNA aan silica-kolom 3. Wasstappen
- Om DNA te isoleren - Supernatans op silica kolom brengen - Wassen met zout/ethanol oplossing
- “lysis buffer” - Silica & DNA negatief geladen o Verwijdert onzuiverheden
o Bevat enzymen & o Stoten elkaar af Eiwitten
surfactanten - MAAR we gebruiken een oplossing Overtollige zouten
o Maken celwand bacteriën met een lage pH (veel positief geladen o pDNA nog steeds gebonden aan
kapot protonen) & hoge zoutconcentratie silica
- Inhoud komt vrij (veel positieve tegenionen, Na+)
o Negatieve lading DNA & silica
afgeschermd 4. Elutie
1.b Centrifugatie o => DNA zal binden op silica
- Elutiebuffer op kolom brengen
- Grote celresten (pellet) & o Hoge pH (weinig protonen) & lage
macromoleculen (supernatans) zoutconcentratie (weinig tegen-ionen)
gescheiden Als we niet gebruik maken van een lage pH
oplossing zal DNA niet kunnen binden op het o Negatieve lading niet meer
- (in practicum beginnen we vanaf stap 2 silica afgeschermd
met het supernatans) o pDNA komt los van de kolom
tijdens centrifugatie
- pDNA nu in het eluens (onbekende
Pellet: korrels concentratie)
Supernatans: vloeistof die na
3
het centrifugeren vrijkomt
Voordelen van het kopen van samenvattingen bij Stuvia op een rij:
Verzekerd van kwaliteit door reviews
Stuvia-klanten hebben meer dan 700.000 samenvattingen beoordeeld. Zo weet je zeker dat je de beste documenten koopt!
Snel en makkelijk kopen
Je betaalt supersnel en eenmalig met iDeal, creditcard of Stuvia-tegoed voor de samenvatting. Zonder lidmaatschap.
Focus op de essentie
Samenvattingen worden geschreven voor en door anderen. Daarom zijn de samenvattingen altijd betrouwbaar en actueel. Zo kom je snel tot de kern!
Veelgestelde vragen
Wat krijg ik als ik dit document koop?
Je krijgt een PDF, die direct beschikbaar is na je aankoop. Het gekochte document is altijd, overal en oneindig toegankelijk via je profiel.
Tevredenheidsgarantie: hoe werkt dat?
Onze tevredenheidsgarantie zorgt ervoor dat je altijd een studiedocument vindt dat goed bij je past. Je vult een formulier in en onze klantenservice regelt de rest.
Van wie koop ik deze samenvatting?
Stuvia is een marktplaats, je koop dit document dus niet van ons, maar van verkoper jadecallebaut. Stuvia faciliteert de betaling aan de verkoper.
Zit ik meteen vast aan een abonnement?
Nee, je koopt alleen deze samenvatting voor €5,99. Je zit daarna nergens aan vast.
Is Stuvia te vertrouwen?
4,6 sterren op Google & Trustpilot (+1000 reviews)
Afgelopen 30 dagen zijn er 80467 samenvattingen verkocht
Opgericht in 2010, al 14 jaar dé plek om samenvattingen te kopen