TE KENNEN UIT PPT & PADLET ✔️= 100% zeker (bv. antwoord uit padlet, …)
LEERDOELEN:
Kort kunnen uitleggen: (basisprincipes) De verschillende methodes die gebruikt worden bij:
o onderzoek naar DNA
o wijzigen van DNA
maar vooral:
o de doelstelling van de verschillende methodes zeer goed begrijpen
o en de opportuniteiten die daaruit voortvloeien kunnen uitleggen (toepassingen cf. LEH 7)
Opmerking Devos in les: Belangrijkste die je moet begrijpen: (Gel)elektroforese, PCR + PCR DGGE, Real-time PCR
RECOMBINANTE DNA TECHNOLOGIE
1. Wat is de doelstelling van gentechologie?
Genetische kenmerken ve organisme:
wijzigen of
overbrengen naar ander organisme
2. Wat zijn restrictie-enzymen
‘Scharen’ die kenmerk uit genetisch materiaal ‘knippen’
(= voluit restrictie-endonucleasen) woord dat eindigt op ‘ase’ altijd enzym / endo = midden ze knippen in het midden
3. Wat is de oorsprong van de restrictie-enzymen?
Bacteriën: gebruiken restrictie-enzymen als bescherming tegen bacteriofagen
↪️knippen DNA v hun belagers stuk. Restrictie-enzymen uit bacteriën isoleren
4. Wat is recombinante DNA technologie?
= wijziging in DNA induceren (ipv spontaan = mutatie)
Bepaald gen wijzigen of overbrengen naar ander organisme
= knip- en plakwerk:
Endonucleasen (knippen) = restrictie-enzymen oorsprong bacteriën
Ligase (plakken)
In een grote DNA-molecule kan de herkenningsplaats ook > 1 keer voorkomen > 1 keer knippen
5. Leg recombinante DNA technologie uit adhv de werking van een restrictie-enzym (bv. EcoRI)
Restrictie-enzymen isoleren uit bacteriën
DNA 1 en 2 geknipt met restrictie-enzym op herkenningsplaats (dus complementaire sticky ends)
Sticky ends hybridiseren met DNA-ligase
= vorming v recombinant DNA molecule
, 6. Oefening: Knip onderstaande moleculen met restrictie-enzym Pst I (cf. Fig. 63)
en creëer uit de ontstane fragmenten twee recombinant DNA moleculen
HOE OPLOSSEN?
1. Zoek herkenningsplaats
2. Knip met restrictie-enzym
3. Combineer de juiste fragmenten
4. Plak met DNA-ligase
OPLOSSING
ELEKTROFORESE VAN DNA
7. Wat is (gel)elektroforese van DNA?
= visualiseren v DNA
↪️DNA fragmenten scheiden op grootte in agarose gel
Bv. als check: Is het knippen gelukt? Is het plakken gelukt? Is er een recombinant DNA molecule van gemaakt?
Bv. voor het identificeren v bacteriën (= vb v toepassing)
Bv. is PCR-reactie goed verlopen?
8. Werking (gel)elektroforese?
(negatief geladen)(bekomen door restrictie-enzymen aan toe te voegen)
DNA-fragmenten bewegen onder invloed v elektrisch veld:
Bewegen in richting v positieve elektrode
↪️Hoe kleiner, hoe sneller
Zijn nu op grootte gescheiden
↪️ Kleurstof in gel: onder UV-licht DNA fragmenten zichtbaar als streepjes
v verschillende grootte ↪️dus visualiseren
Voordelen van het kopen van samenvattingen bij Stuvia op een rij:
Verzekerd van kwaliteit door reviews
Stuvia-klanten hebben meer dan 700.000 samenvattingen beoordeeld. Zo weet je zeker dat je de beste documenten koopt!
Snel en makkelijk kopen
Je betaalt supersnel en eenmalig met iDeal, creditcard of Stuvia-tegoed voor de samenvatting. Zonder lidmaatschap.
Focus op de essentie
Samenvattingen worden geschreven voor en door anderen. Daarom zijn de samenvattingen altijd betrouwbaar en actueel. Zo kom je snel tot de kern!
Veelgestelde vragen
Wat krijg ik als ik dit document koop?
Je krijgt een PDF, die direct beschikbaar is na je aankoop. Het gekochte document is altijd, overal en oneindig toegankelijk via je profiel.
Tevredenheidsgarantie: hoe werkt dat?
Onze tevredenheidsgarantie zorgt ervoor dat je altijd een studiedocument vindt dat goed bij je past. Je vult een formulier in en onze klantenservice regelt de rest.
Van wie koop ik deze samenvatting?
Stuvia is een marktplaats, je koop dit document dus niet van ons, maar van verkoper carolinelaevaert. Stuvia faciliteert de betaling aan de verkoper.
Zit ik meteen vast aan een abonnement?
Nee, je koopt alleen deze samenvatting voor €6,49. Je zit daarna nergens aan vast.