Samenvatting
summary of the crisprcas lecture 2024
- Vak
- Instelling
summary of the crisprcas lecture 2024
[Meer zien]Voorbeeld 2 van de 10 pagina's
Voorbeeld 2 van de 10 pagina's
In winkelwagen
In winkelwagen
gesponsord bericht van onze partner
Verkoper
Volgen
biomed124
Voorbeeld van de inhoud
GENOME EDITINGGenome editing makes targeted changes in the DNA of a living cell or organism.
It can be used to add or remove DNA in the genome or to alter its sequence.
A. Tagging of “protein of interest” with e.g. GFP, venus
a. Can tag a protein to visualize it under the microscope.
i. Fluorescent tag
B. To create mutant mice/cells to study a disease or
biological process
a. By adding a mutation that is found in
humans and add it to another cell to make
it mutant.
C. To remove mutations in patients to cure a disease
Q1: you want to study the effects of a mutation by comparing the behavior of cells
expressing normal and mutant proteins genome editing is always preferred over
transfection/transduction of WT mutant over expression constructs
TRUE: for the biological POV: not truncated to express large volumes able to get
artefacts because the cell is made to fold normal levels not excessive cellular
phenotype is not attributed to the … as such.
o We assume that the transfection efficiency will be the same
Expressed at physiological levels and time points
- No artefacts attributed to excessive expression levels
- WT/mutant should express similarly (protein of interest)
- No confounding effect of endogens
FALSE: for the technical POV: suboptimal sensitivity of tools for subsequent
functional analyses
o Some Ab cannot detect low protein levels
o Lack of Ab specifity in some cases
HOW IT ALL STARTED
2 repair mechanisms
- Add a repair template is its available insert point mutation in cells
- Non homologous end joining breaks will be ligated again BUT error prone
o Can result in a knock out or LOF
, Only an ending number of nucleases we can utilize can’t just make all the specific
point mutations
NEED for alternatives
ALTERNATIVES
ZNF: zinc finger nucleases
- Artificial endonucleases
- Custom DNA target
Consists of 2 parts
1. DNA-binding domains of transcription factors linked to nuclease domain of Fok1
(protein arm)
Modular zinc finger protein, each module recognizes ±3 bp (up to 6 modules)
2. Two arms – Fok1 functions as a dimer
Disadvantages: time consuming and not that straight forward, need for a specific zinc
finger
NEED 2 arms for active cutting
Concluding: better but not optimal
Voordelen van het kopen van samenvattingen bij Stuvia op een rij:
Verzekerd van kwaliteit door reviews
Stuvia-klanten hebben meer dan 700.000 samenvattingen beoordeeld. Zo weet je zeker dat je de beste documenten koopt!
Snel en makkelijk kopen
Je betaalt supersnel en eenmalig met iDeal, creditcard of Stuvia-tegoed voor de samenvatting. Zonder lidmaatschap.
Focus op de essentie
Samenvattingen worden geschreven voor en door anderen. Daarom zijn de samenvattingen altijd betrouwbaar en actueel. Zo kom je snel tot de kern!
Veelgestelde vragen
Wat krijg ik als ik dit document koop?
Je krijgt een PDF, die direct beschikbaar is na je aankoop. Het gekochte document is altijd, overal en oneindig toegankelijk via je profiel.
Tevredenheidsgarantie: hoe werkt dat?
Onze tevredenheidsgarantie zorgt ervoor dat je altijd een studiedocument vindt dat goed bij je past. Je vult een formulier in en onze klantenservice regelt de rest.
Van wie koop ik deze samenvatting?
Stuvia is een marktplaats, je koop dit document dus niet van ons, maar van verkoper biomed124. Stuvia faciliteert de betaling aan de verkoper.
Zit ik meteen vast aan een abonnement?
Nee, je koopt alleen deze samenvatting voor €7,16. Je zit daarna nergens aan vast.
Is Stuvia te vertrouwen?
4,6 sterren op Google & Trustpilot (+1000 reviews)
Afgelopen 30 dagen zijn er 81311 samenvattingen verkocht
Opgericht in 2010, al 14 jaar dé plek om samenvattingen te kopen