Samenvatting
practical summary plant biotech
- Instelling
- Wageningen University (WUR)
a summary based on the practicals from based on the labbuddy environment
[Meer zien]Voorbeeld 2 van de 12 pagina's
Voorbeeld 2 van de 12 pagina's
In winkelwagengesponsord bericht van onze partner
Verkoper
Volgen
Voorbeeld van de inhoud
Practical summary term 2, 2024-2025The practical is build up from different steps, these steps are broadly:
1. Isolation of the Gene Of Interest (GOI)
2. Making the entry vector
3. Making the expression vector
4. Transformation of A. tumefaciens
5. Transient plant transformation
6. Analysis of transgene expression in plants
Isolation of the GOI
During this step we identified the gene that will enable the red colouration in the
tobacco leaves.
This red colouration is usually anthochyanins or carotenoids. For both the
biochemical pathway has been elucidated and responsible enzymes and
transcription factors controlling the expression of these enzymes have been
characterized in many plants.
Knowledge on biochemical pathways and the genes involved allow a person to
activate such pathways in plants or plant parts under conditions in which the
biochemical pathway is normally not active.
Gene delivery methods in plants:
- Direct DNA delivery
Particle bombardment: DNA is physically shot into plant cells
Electroporation/PEG-mediated transformation: DNA is
delivered into protoplasts (plant cells without cell walls) via
electrical pulses or chemical treatments
- Indirect DNA delivery via A. tumefaciens
Agrobacterium transfers part of its plasmid (T-DNA) into the
plant genome
T-DNA carries genes for plant hormones and metabolites that
introduce tumors (tumor-inducing or Ti-plasmid), but there
tumor-causing genes are replaced with the gene of interest
(GOI)
The Ti-plasmid becomes a modified expression vector for
plant transformation
Gateway cloning system:
, - Efficiently transfers DNA fragments between bacterial vectors using
recombinases LR clonase and BP clonase
1. Att-site recombination
DNA fragments are flanked
by attB sites in PCR
products
BP clonase facilitates
recombination between
attB sites (in PCR) and
attP sites (in donor
vector) to create an entry
vector
The ccdB gene in the
donor vector kills bacteria
that do not undergo successful recombination
2. Transformation and selection
E.coli is transformed
with the recombination
mix, selecting for
bacteria containing the entry vector via an antibiotic
resistance gene in the backbone of the donor vector
The ccdB gene in the donor vector kills bacteria that did not
recombine
3. Confirming entry vector
After selecting a single E.coli clone, the DNA sequence of
the GOPI in the entry vector is confirmed to ensure no
mutations occurred during PCR
4. Shuttling to expression vector
The GOI from the donor vector can be recombined into an
expression vector (destination vector) using LR clonase
LR clonase recombines attL sties (from entry vector) with
attR sites (in the expression vector), and the process creates
attB and attP sites making the reaction reversible
5. Transformation and selection of expression vector
The recombinant expression vector is transferred to E.coli.
Selection is done using a different antibiotic resistance
gene compared to the other entry vector
The ccdB gene in the destination vector kills bacteria that do
not carry the correct recombinant vector
6. Confirmation of expression vector
No need to sequence the GOI again since the recombination
process is highly accurate. A restriction enzyme digest is
used to confirm the correct insertion
Design isolation primers:
Voordelen van het kopen van samenvattingen bij Stuvia op een rij:
Verzekerd van kwaliteit door reviews
Stuvia-klanten hebben meer dan 700.000 samenvattingen beoordeeld. Zo weet je zeker dat je de beste documenten koopt!
Snel en makkelijk kopen
Je betaalt supersnel en eenmalig met iDeal, creditcard of Stuvia-tegoed voor de samenvatting. Zonder lidmaatschap.
Focus op de essentie
Samenvattingen worden geschreven voor en door anderen. Daarom zijn de samenvattingen altijd betrouwbaar en actueel. Zo kom je snel tot de kern!
Veelgestelde vragen
Wat krijg ik als ik dit document koop?
Je krijgt een PDF, die direct beschikbaar is na je aankoop. Het gekochte document is altijd, overal en oneindig toegankelijk via je profiel.
Tevredenheidsgarantie: hoe werkt dat?
Onze tevredenheidsgarantie zorgt ervoor dat je altijd een studiedocument vindt dat goed bij je past. Je vult een formulier in en onze klantenservice regelt de rest.
Van wie koop ik deze samenvatting?
Stuvia is een marktplaats, je koop dit document dus niet van ons, maar van verkoper isisjanssen99. Stuvia faciliteert de betaling aan de verkoper.
Zit ik meteen vast aan een abonnement?
Nee, je koopt alleen deze samenvatting voor €2,99. Je zit daarna nergens aan vast.
Is Stuvia te vertrouwen?
4,6 sterren op Google & Trustpilot (+1000 reviews)
Afgelopen 30 dagen zijn er 52510 samenvattingen verkocht
Opgericht in 2010, al 14 jaar dé plek om samenvattingen te kopen