Histologische onderzoekstechnieken
1 Inleiding
Celbiologen en histologen: onderzoeken structuur van cellen & weefsels → technische hulpmiddelen
2 Optische principes
2.1 Golflengte
3 belangrijke elementen bij microscopen:
Lichtbron
Specimen
Geheel van lenzen → licht gecontentreerd op specimen
Lichtmicroscoop: rechtsreek waarnemen via oculair/ detector
Elektronenmicroscoop: elektronenbundel via elektromagnetische spoelen → fluorescerend scherm
Specimen/ object: golflengte van licht/ elektronenbundel verstoren
Kleine subcellulaire structuren niet zichtbaar: te klein om golflengte te verstoren
2.2 Resolutie of scheidend vermogen
Interferentie: proces waarbij 2/ meerdere golven door combinatie elkaar versterken/ verzwakken
waardoor finaal een golf ontstaat die het resultaat is van de som van de combinerende golven
Beeld = geheel van additieve/ inhiberende inferentie van golven (= diffractie)
Brandpuntsafstand: afstand tussen de lens &
het punt waarin de stralen convergeren na
passage doorgeen de lens
Angulaire apertuur: helft van hoek α vd
lichtkegel vanuit het specimen doorheen de
objectieflens
Resolutie (r): kleinste afstand tussen 2 punten
waarbij deze punten nog als 2 afzonderlijke
punten kunnen gezien worden
golflengte 0.61 λ 0.61 λ
r= = =
brekingsindex∗sin α n sin α NA
NA= numerieke apertuur
Golflengte zichtbaar licht: 400-700 nm → 450nm bij lichtmicroscoop
Brekingsindex lucht: 1.0
Angulaire apertuur 70° en sin = 0.94
0.61∗450 nm
r= =292 nm
0.94
Verhogen door het medium: vb brekingsindex olie = 1.5
0.61∗450 nm
r= =196 nm
1.5∗0.94
2.3 Contrast
Dierlijke weefsels: bijna geen contrast → kleurstoffen (= toxic dus dode cellen)
, 3 De lichtmicroscoop
Baan van het licht:
1. Lichtbron
2. Condensorlens: licht gestuurd & geconcentreerd op
specimen ≠ vergrotingsfactor
3. Objectieflens: vlak boven specimen & vormt primair
beeld
NA bepaalt resolutie & vergroting
4. Oculair lens: primaire beeld opgevangen & vergroot
3.1 Fasecontrast microscoop
Contrast verhogen zonder weefsel te kleuren → levende weefsels
Werking: lichtbundel = verschillende lichtstralen met een gelijke
fase → stralen doorheen object => faseverschil (= nier
waarneembaar voor menselijk oog) → faseverschil omzetten in amplitudewijzigingen (= zichtbaar
voor menselijk oog)
Ring 1: zorgt voor fase
Ring 2: zorgt voor amplitudewijziging
3 soorten afbrekingen:
3.2 Differentieel interferentiecontrast (DIC) microscopie
Dezelfde principes als fasecontrastmicroscopen MAAR DIC microscoop = gevoeliger & 3D aspect door
het schaduweffect
3.3 Fluorescentiemicroscopie
Luminescentie: proces waarbij licht geabsorbeerd
wordt door een molecule waarna deze zelf licht
uitzendt → foton in geëxciteerte status
Excitatielicht: inkomend licht ( kortere
golflengte)
Emissielicht: uitgezonde licht ( langere
golflengte)
Fosforescentie: emissie van licht blijft bestaan na
belichting
Fluorescentie: enkel emissie tijdens het belichten
Photo bleaching: excitatie te lang →
veroorzaakt uitdoving waardoor geen emissie meer wordt
uitgezonden
Fluorescentiemicroscopen: werken met UV-licht → schadelijk voor
het oog
Voordelen van het kopen van samenvattingen bij Stuvia op een rij:
Verzekerd van kwaliteit door reviews
Stuvia-klanten hebben meer dan 700.000 samenvattingen beoordeeld. Zo weet je zeker dat je de beste documenten koopt!
Snel en makkelijk kopen
Je betaalt supersnel en eenmalig met iDeal, creditcard of Stuvia-tegoed voor de samenvatting. Zonder lidmaatschap.
Focus op de essentie
Samenvattingen worden geschreven voor en door anderen. Daarom zijn de samenvattingen altijd betrouwbaar en actueel. Zo kom je snel tot de kern!
Veelgestelde vragen
Wat krijg ik als ik dit document koop?
Je krijgt een PDF, die direct beschikbaar is na je aankoop. Het gekochte document is altijd, overal en oneindig toegankelijk via je profiel.
Tevredenheidsgarantie: hoe werkt dat?
Onze tevredenheidsgarantie zorgt ervoor dat je altijd een studiedocument vindt dat goed bij je past. Je vult een formulier in en onze klantenservice regelt de rest.
Van wie koop ik deze samenvatting?
Stuvia is een marktplaats, je koop dit document dus niet van ons, maar van verkoper elisevandehaterd. Stuvia faciliteert de betaling aan de verkoper.
Zit ik meteen vast aan een abonnement?
Nee, je koopt alleen deze samenvatting voor €2,99. Je zit daarna nergens aan vast.