Hoorcollege 1: Flowcytometrie
Immunologisch onderzoek :
Identificeren van cellen
Karakteriseren van cellen
Isoleren van cellen : functionele testen uitvoeren
Het zichtbaar maken van antigenen in/op cellen met behulp van antilichamen = CIE
Hoe onderscheiden we de cellen ? Alle 10 basisspellers hebben een eigen CD marker ( epitopen dat
cell types identificeren, ook in de fases van differentiatie )
= Immunochemie / immunofluorescentie
Antilichamen : geproduceerd door B cellen in reactie op specifiek antigenen, reageren specifiek met
één epitoop ( sleutelslot)
- Gebruik van antilichamen om verschillende cellen te herkennen.
- Antilichaam met fluorescent label ! (aanstralen bij bepaalde golflengte en uitstralen bij
andere golflengte)
Als antilichaam bindt aan de marker ontstaat er een kleur. Niet dezelfde fluorescente kleur = ander
antilichaam.
Fluorescentie microscoop :
Voordeel
- Bepalen van locatie van cellen/antigenen
Nadelen
- Kost veel tijd
- Moeilijk te kwantificeren (subjectief)
Flowcytometrie :
- Cellen in suspensie worden gelabeled met antilichamen met een
fluorescent label.
- Cellen worden geanalyseerd m.b.v detector = snelle, individuele
analyse van vele cellen = verschillende detectoren
De eerste plot die je maakt : FSC/SSC
Forwards scatter = celgrootte
Side scatter = granulariteit
, Altijd ongekleurd sample/ isotype meenemen om te bepalen waar negatieve liggen!
Er moet meer FITC worden afgetrokken van PE signaal: want er zou geen PE signaal moeten zijn :
geen antilichamen die kunnen binden… (Dus -FITC moet omhoog)
FACS = fluorescence-activated cell sorting : op basis van een apparaat fluorescentie en alle soorten in
buisjes sorteren.
Hoorcollege 2 : ELISA : Enzyme-linked immunosorbent assay
Toepassingen :
Humane geneeskunde en diergeneeskunde
- Diagnostiek
- Therapie
- Research
Agricultuur
- Plantenhormonen
- Micro-organismen, virussen
Voedselveiligheid
- Micro-organismen, virussen, toxinen
Milieu
- Pesticiden en hun metabolieten (vb atrazine)
- Milieuverontreinigende stoffen (vb dioxines, PBB’s)
Ook hormonen kunnen gemeten worden met ELISA.
ELISA bindt aan alles wat lichaamsvreemd is.
Voordelen ELISA :
- Gemakkelijke toepasbaarheid/ eenvoudige techniek
- Veelzijdig: heel veel verschillende soorten molekulen kunnen gemeten worden (virusdeeltjes,
eiwitten, hormonen, etc.)
- Kwantitatief: hoeveelheden kunnen bepaald worden
- Gevoelig, sensitief: kleine hoeveelheden al detecteerbaar
- Specifiek, reproduceerbaar: kleine foutmarge
ELISA = speciaal soort plastic, alles ( antigen) blijft eraan plakken. (coating)
Alles wordt in overmaat toegevoegd.
Blocking buffer voorkomen van aspecifieke bindingen = lege plekjes opvullen
Algemene stappen in een ELISA :
Voordelen van het kopen van samenvattingen bij Stuvia op een rij:
Verzekerd van kwaliteit door reviews
Stuvia-klanten hebben meer dan 700.000 samenvattingen beoordeeld. Zo weet je zeker dat je de beste documenten koopt!
Snel en makkelijk kopen
Je betaalt supersnel en eenmalig met iDeal, creditcard of Stuvia-tegoed voor de samenvatting. Zonder lidmaatschap.
Focus op de essentie
Samenvattingen worden geschreven voor en door anderen. Daarom zijn de samenvattingen altijd betrouwbaar en actueel. Zo kom je snel tot de kern!
Veelgestelde vragen
Wat krijg ik als ik dit document koop?
Je krijgt een PDF, die direct beschikbaar is na je aankoop. Het gekochte document is altijd, overal en oneindig toegankelijk via je profiel.
Tevredenheidsgarantie: hoe werkt dat?
Onze tevredenheidsgarantie zorgt ervoor dat je altijd een studiedocument vindt dat goed bij je past. Je vult een formulier in en onze klantenservice regelt de rest.
Van wie koop ik deze samenvatting?
Stuvia is een marktplaats, je koop dit document dus niet van ons, maar van verkoper jillspaander. Stuvia faciliteert de betaling aan de verkoper.
Zit ik meteen vast aan een abonnement?
Nee, je koopt alleen deze samenvatting voor €5,99. Je zit daarna nergens aan vast.