Samenvatting
B05MBT Samenvatting Moleculaire Biologie
- Instelling
- Hogeschool Leiden (HSL)
B05MBT Samenvatting Moleculaire Biologie Theorie. Ik heb een 8,6 gehaald voor het tentamen, door deze samenvatting.
[Meer zien]Voorbeeld 4 van de 69 pagina's
Voorbeeld 4 van de 69 pagina's
In winkelwagengesponsord bericht van onze partner
Voorbeeld van de inhoud
Moleculaire BiologieTheorie
,Inhoud
1. De PCR................................................................................................................................................5
1.1. Werking van de PCR.....................................................................................................................7
1.2. PCR protocol................................................................................................................................8
1.3. Wat heb je nodig bij een PCR?.....................................................................................................8
1.3.1. Template DNA.......................................................................................................................9
1.3.2. Overige ingrediënten in de PCR-reactie................................................................................9
1.4. Polymerases en proofreading....................................................................................................11
2. Ontwerpen van primers....................................................................................................................12
2.1. Algemene regels voor primer design.........................................................................................14
3. Kloneren...........................................................................................................................................15
3.1. Plasmiden..................................................................................................................................15
3.2. Stap 1: Gebruik van restrictie-enzymen om DNA te knippen en plasmide te lineariseren........17
3.2.1. Type II endonucleases geven sticky-ends of Blunt ends.....................................................18
3.2.2. Relaties tussen restrictie-enzymen.....................................................................................18
3.2.3. Knippen met 1 of 2 RE.........................................................................................................19
3.3. Stap 2: Ligeer een DNA fragment in een plasmide.....................................................................19
3.3.1. Ligase protocol....................................................................................................................19
3.4. Primers ontwerpen met restrictie-sites.....................................................................................20
3.5. Digestie controle (insert oriëntatie)...........................................................................................21
3.6. Controle van gemaakt plasmide................................................................................................22
3.7. Stap 3: transformatie in bacteriën.............................................................................................23
3.8. Stap 4: identificeer en isoleer een kolonie met het target DNA................................................24
4. Transformeren en Transfecteren......................................................................................................25
4.1. Transformeren van eukaryote cellen; injecteren, transfecteren en transductie.......................25
5. Isoleren van DNA, RNA en eiwitten..................................................................................................27
5.1. Orgaan, weefsel of biopt homogeniseren..................................................................................28
5.2. Lyseren of sonificeren van cellen, micro-organismen en kleine weefsels..................................29
5.3. Scheiden van bestandsdelen dmv centrifugatie........................................................................32
5.4. Isoleren van nucleinezuren (RNA en DNA).................................................................................33
5.4.1. DNA/ RNA hoeveelheid & kwaliteit....................................................................................34
6. De Real-Time qPCR...........................................................................................................................35
6.1. RNA............................................................................................................................................35
6.1.1. Werken met RNA................................................................................................................35
6.2. Meten van RNA met een Northern blot.....................................................................................36
, 6.3. Meten van RNA met de real-time qPCR.....................................................................................37
6.3.1. Van RNA naar cDNA............................................................................................................37
6.3.2. Hoe meet je tijdens een RT qPCR?......................................................................................38
6.4. Detectie, analyse en kwantificering...........................................................................................40
6.4.1. Efficiëntie van de qPCR.......................................................................................................41
6.4.2. Het kwantificeren van de qPCR-data..................................................................................42
7. Sequencing.......................................................................................................................................43
7.1. Sanger sequencing.....................................................................................................................44
7.2. 2nd generation sequencing.......................................................................................................45
7.2.1. Illumina sequencing............................................................................................................45
7.2.2. Ion torrent..........................................................................................................................46
7.3. 3rd generation sequencing........................................................................................................46
8. Eiwitsequenties en massa spectrometrie.........................................................................................47
8.1. 5 fasen in massa analyse in een massa spectrometer...............................................................47
8.2. MALDI-TOF.................................................................................................................................48
8.3. Elektrosprayionisatie (ESI).........................................................................................................48
8.4. Tandem mass spectrometry......................................................................................................49
8.5. Eiwit analyse..............................................................................................................................50
9. Enzymkinetiek...................................................................................................................................51
9.1 Enzymen.....................................................................................................................................51
9.2. Remming van enzymen..............................................................................................................54
9.3. Enzymkinetiek............................................................................................................................55
9.3.1. Michaelis-Menten verzadigingscurve.................................................................................56
9.3.2. IC50.....................................................................................................................................58
10. Eiwitisolatie/zuivering....................................................................................................................59
10.1. Uitzouten.................................................................................................................................60
10.1.1. Ontzouten.........................................................................................................................61
10.2.1. Ionwisselingschromatografie (IEC)....................................................................................63
10.2.2. Hydrofobe interactie chromatografie...............................................................................64
10.2.3. Affiniteitschromatografie..................................................................................................65
10.2.4. Gelfiltratie/ gelpermeatie chromatografie........................................................................66
10.3. Volgorde van verschillende methoden....................................................................................67
11. Eiwit analyse...................................................................................................................................68
11.1. SDS-PAGE.................................................................................................................................68
11.2. Iso-elektrisch focussing............................................................................................................69
11.3. 2D elektroforese......................................................................................................................69
, 11.4. Western blot............................................................................................................................69
Voordelen van het kopen van samenvattingen bij Stuvia op een rij:
Verzekerd van kwaliteit door reviews
Stuvia-klanten hebben meer dan 700.000 samenvattingen beoordeeld. Zo weet je zeker dat je de beste documenten koopt!
Snel en makkelijk kopen
Je betaalt supersnel en eenmalig met iDeal, creditcard of Stuvia-tegoed voor de samenvatting. Zonder lidmaatschap.
Focus op de essentie
Samenvattingen worden geschreven voor en door anderen. Daarom zijn de samenvattingen altijd betrouwbaar en actueel. Zo kom je snel tot de kern!
Veelgestelde vragen
Wat krijg ik als ik dit document koop?
Je krijgt een PDF, die direct beschikbaar is na je aankoop. Het gekochte document is altijd, overal en oneindig toegankelijk via je profiel.
Tevredenheidsgarantie: hoe werkt dat?
Onze tevredenheidsgarantie zorgt ervoor dat je altijd een studiedocument vindt dat goed bij je past. Je vult een formulier in en onze klantenservice regelt de rest.
Van wie koop ik deze samenvatting?
Stuvia is een marktplaats, je koop dit document dus niet van ons, maar van verkoper LaboratoryNerd. Stuvia faciliteert de betaling aan de verkoper.
Zit ik meteen vast aan een abonnement?
Nee, je koopt alleen deze samenvatting voor €4,69. Je zit daarna nergens aan vast.
Is Stuvia te vertrouwen?
4,6 sterren op Google & Trustpilot (+1000 reviews)
Afgelopen 30 dagen zijn er 59063 samenvattingen verkocht
Opgericht in 2010, al 15 jaar dé plek om samenvattingen te kopen