Tentamen (uitwerkingen)
oefentoets + antwoorden
- Vak
- GEN
- Instelling
- Hogeschool Leiden (HSL)
Afgerond met een 7.3
[Meer zien]Voorbeeld 1 van de 4 pagina's
Voorbeeld 1 van de 4 pagina's
In winkelwagengesponsord bericht van onze partner
Voorbeeld van de inhoud
Vraag 1 eukaryootJe krijgt de opdracht om een zebravis te maken die knock-out is voor het gen activating transcription
factor 3 (atf3). Dit doe je door met behulp van CRISPR-Cas9 een dubbelstrengs DNA breuk aan te
brengen in het atf3-gen. Hieronder staat het deel van het atf3-gen aangegeven waarin je de
dubbelstrengs breuk gaat aanbrengen:
5’CTCTC GCTTCATCCC AGGTAGTTCG GTGGGTCTCT CAGTGTTCAT GCAGGCTCTG
TCAGTGGTCA GGGTGCTCAT GCCGTTGGAC ATGCGTTTGT TCTGGATGGC GTAGCGCAGC
TCCTCTTTCA CTAATGGAGT GAAGTTTGTG AAGTCGTCCA GCGTGAGGGA ACCGGGCGGA
GAGAGACAGG GAACCAAAGC TGACGCACTG ATCTCTGACG GACCCAAACC AGGGTGCTGA
AGCATCATGC
a) Ontwerp op basis van bovenstaande sequentie het target-specifieke deel van het sgRNA dat je
gaat gebruiken om de dubbelstrengs breuk aan te brengen (5 punten).
Aan de volgende voorwaarden moet daarbij worden voldaan:
*Ga ervan uit dat dit target-specifieke deel van het sgRNA 20 nucleotiden lang moet zijn
*Ga ervan uit dat het sgRNA verderop in de procedure d.m.v. in vitro transcriptie gesynthetiseerd zal
worden vanaf een T7-promoter
*Geef de nucleotiden-sequentie van dit target-specifieke deel van het sgRNA van 5’ naar 3’ weer
*Onderstreep in bovenstaande sequentie van het Atf3 gen de locatie van het door jouw ontwikkelde
target-specifieke deel van het sgRNA
In vraag 1a) heb je het target-specifieke deel van het sgRNA ontworpen. Het volledige sgRNA bevat
naast dit target-specifieke deel ook nog een algemeen deel. De sequentie van dit algemene deel is als
volgt:
5’GUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGG
CACCGAGUCGGUGCGGAUC
Het volledige sgRNA zal vervolgens gemaakt gaan worden door, met behulp van PCR, dubbelstrengs
DNA te maken waarin het sgRNA aan een T7-promoter gekoppeld is. Vervolgens wordt dit
dubbelstrengs DNA gebruikt om een in vitro transcriptie vanaf de T7-promoter uit te voeren waardoor
er sgRNA gesynthetiseerd wordt.
De sequentie en afleesoriëntatie voor de T7-promoter zijn als volgt:
5’GCGTAATACGACTCACTATA
b) Aan welke kant van het door jou ontworpen gen-specifieke deel van het sgRNA moet het algemene
deel van de sgRNA komen?
c) Aan welke kant van het sgRNA moet de T7 promoter komen?
Om de dubbelstrengs DNA breuk te maken in het Atf3-gen in de zebravis is naast het sgRNA ook het
Cas9 eiwit nodig. Hiervoor wordt Cas9 mRNA afgeschreven van het pCS2-nCas9n-plasmide waarop
het gen voor Cas9 ligt. Vervolgens wordt dit Cas9 mRNA samen met het sgRNA geïnjecteerd in
zebravis embryo’s.
Het Cas9-gen dat op het pCS2-nCas9n-plasmide ligt is codon-geoptimaliseerd voor zebravis.
Voordelen van het kopen van samenvattingen bij Stuvia op een rij:
Verzekerd van kwaliteit door reviews
Stuvia-klanten hebben meer dan 700.000 samenvattingen beoordeeld. Zo weet je zeker dat je de beste documenten koopt!
Snel en makkelijk kopen
Je betaalt supersnel en eenmalig met iDeal, creditcard of Stuvia-tegoed voor de samenvatting. Zonder lidmaatschap.
Focus op de essentie
Samenvattingen worden geschreven voor en door anderen. Daarom zijn de samenvattingen altijd betrouwbaar en actueel. Zo kom je snel tot de kern!
Veelgestelde vragen
Wat krijg ik als ik dit document koop?
Je krijgt een PDF, die direct beschikbaar is na je aankoop. Het gekochte document is altijd, overal en oneindig toegankelijk via je profiel.
Tevredenheidsgarantie: hoe werkt dat?
Onze tevredenheidsgarantie zorgt ervoor dat je altijd een studiedocument vindt dat goed bij je past. Je vult een formulier in en onze klantenservice regelt de rest.
Van wie koop ik deze samenvatting?
Stuvia is een marktplaats, je koop dit document dus niet van ons, maar van verkoper vascocr. Stuvia faciliteert de betaling aan de verkoper.
Zit ik meteen vast aan een abonnement?
Nee, je koopt alleen deze samenvatting voor €2,99. Je zit daarna nergens aan vast.
Is Stuvia te vertrouwen?
4,6 sterren op Google & Trustpilot (+1000 reviews)
Afgelopen 30 dagen zijn er 62890 samenvattingen verkocht
Opgericht in 2010, al 14 jaar dé plek om samenvattingen te kopen