Samenvatting
Samenvatting Werkplan CBO
- Vak
- CBO
- Instelling
- Hogeschool Leiden (HSL)
Met een voldoende afgerond
[Meer zien]Voorbeeld 3 van de 18 pagina's
Voorbeeld 3 van de 18 pagina's
In winkelwagengesponsord bericht van onze partner
Voorbeeld van de inhoud
Het effect van etoposide op Jurkatcellen aan tonen met behulp van de
FACS en MGG-kleuring assays
Namen: -
Datum (inleveren): 10-12-2019
Docent: -
Thema: Celbiologie en Immunochemie
Module: CBO
Werkplan 1e gelegenheid
,Inhoudsopgave
Inhoudsopgave....................................................................................................................... 2
Inleiding.................................................................................................................................. 3
Onderzoeksvraag................................................................................................................3
Proefopzet.......................................................................................................................... 3
Hypothese........................................................................................................................... 3
Tijdsplanning....................................................................................................................... 4
Praktijk 1................................................................................................................................. 5
Celkweek............................................................................................................................ 5
Levend/dood telling met trypaanblauw................................................................................7
Praktijk 2................................................................................................................................. 8
FACS.................................................................................................................................. 8
Praktijk 3............................................................................................................................... 10
Cytospins maken.............................................................................................................. 10
Cytospins kleuren met MGG.............................................................................................11
Bijlage.................................................................................................................................. 12
Meten van cellen met behulp van Guave Soft 3.1.1..........................................................12
Risicoanalyse.................................................................................................................... 14
Praktijk 1....................................................................................................................... 14
Praktijk 3....................................................................................................................... 15
Vragen werkcollege.......................................................................................................... 17
2
, Inleiding
Onderzoeksvraag
Het onderzoeksvraag en deelvraag voor dit onderzoek luidt als volgt:
“Kan het effect van etoposide worden aangetoond in Jurkat cellen met behulp van de FACS
en MGG-kleuring assays?”
“Welke van de gebruikte techniek toont het beste het effect van etoposide aan?”
Proefopzet
In dit onderzoek wordt gebruik gemaakt van Jurkat cellen wat een onsterfelijke cellijn van
menselijke T-lymfocyten is. Het effect van etoposide wordt onderzocht door twee
technieken. Eerst wordt er voorafgaand een celkweek uitgevoerd. Er wordt een mix gemaakt
met Jurkat cellen en etoposide opgelost in DMSO. Als negatieve controle worden alleen de
Jurkat cellen in de DMSO opgelost om het mogelijke effect van DMSO op de cellen uit te
sluiten.
Vervolgens wordt de FACS assay ingezet. FACS in gebaseerd op immunologische
eigenschappen en wordt uitgevoerd met de antilichamen Annexin αV-FITC en αPI. Annexin
V bindt specifiek aan fosfatidylserine, dit komt vrij bij cellen die in apoptose zitten. FITC
veroorzaakt hierbij de groene fluorescentie. Propidium iodide (αPI) is een fluorescente stof
die niet door het celmembraan heen kan waardoor alleen de necrotische cellen worden
aangekleurd. Necrotische cellen zijn cellen waarbij het celmembraan kapot is waarbij de
inhoud vrijkomt. Apoptose cellen is (zie figuur onderin). Hierna worden de cellen gemeten
door een laser met behulp van de fluorescentie die van de necrotische cellen afkomt.
Daarna wordt de MGG-kleuring ingezet. Eerst wordt er een cytospin uitgevoerd waar de
cellen worden gecentrifugeerd en op een glaasje worden geplaatst. Het glaasje met de
cellen wordt vervolgens gekleurd met MGG zodat ze onder een lichtmicroscoop met behulp
van een Bürker Telkamer geteld kunnen worden. Hierbij wordt er gekeken naar de vorm wat
normale cellen van cellen in apoptose cellen onderscheiden.
Hypothese
Aangezien etoposide de celdeling remt wordt er verwacht dat er bij zowel de FACS assay
als de MGG-kleuring assay wordt aangetoond dat er inderdaad minder cellen zullen zijn bij
de monsters die met etoposide zijn behandeld dan bij de controles. Daarnaast is de
verwachting dat de FACS assay beter resultaat zal geven omdat het een snelle en effectieve
manier is om cellen te analyseren.
3
Voordelen van het kopen van samenvattingen bij Stuvia op een rij:
Verzekerd van kwaliteit door reviews
Stuvia-klanten hebben meer dan 700.000 samenvattingen beoordeeld. Zo weet je zeker dat je de beste documenten koopt!
Snel en makkelijk kopen
Je betaalt supersnel en eenmalig met iDeal, creditcard of Stuvia-tegoed voor de samenvatting. Zonder lidmaatschap.
Focus op de essentie
Samenvattingen worden geschreven voor en door anderen. Daarom zijn de samenvattingen altijd betrouwbaar en actueel. Zo kom je snel tot de kern!
Veelgestelde vragen
Wat krijg ik als ik dit document koop?
Je krijgt een PDF, die direct beschikbaar is na je aankoop. Het gekochte document is altijd, overal en oneindig toegankelijk via je profiel.
Tevredenheidsgarantie: hoe werkt dat?
Onze tevredenheidsgarantie zorgt ervoor dat je altijd een studiedocument vindt dat goed bij je past. Je vult een formulier in en onze klantenservice regelt de rest.
Van wie koop ik deze samenvatting?
Stuvia is een marktplaats, je koop dit document dus niet van ons, maar van verkoper vascocr. Stuvia faciliteert de betaling aan de verkoper.
Zit ik meteen vast aan een abonnement?
Nee, je koopt alleen deze samenvatting voor €3,49. Je zit daarna nergens aan vast.
Is Stuvia te vertrouwen?
4,6 sterren op Google & Trustpilot (+1000 reviews)
Afgelopen 30 dagen zijn er 53340 samenvattingen verkocht
Opgericht in 2010, al 14 jaar dé plek om samenvattingen te kopen